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CYP3A是肝脏微粒体细胞色素P450中最重要的代谢酶，约占肝脏微粒体P450总量的25-28％，在药物代谢过程中起重要作用，约有60％临床药物在人体内经肝脏CYP3A代谢。孕烷X受体(PXR)是新发现的孤儿核受体(系统名：NR1I2)，主要在肝细胞表达。PXR是CYP3A基因表达的转录活化因子，在调控肝细胞CYP3A基因表达过程中发挥非常重要的作用。本文研究了脂多糖(LPS)对小鼠肝脏PXR及其靶基因CYP3A的下调作用，并深入探讨了Kupffer细胞、活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)在LPS下调小鼠肝脏PXR和CYP3A中的作用。 1．LPS对小鼠肝脏核受体PXR及其靶基因CYP3A的下调作用 为研究LPS对小鼠肝脏PXR和CYP3A基因表达的下调作用，经腹腔注射给予小鼠一定剂量(0.1～5.0mg／kg)的LPS，给药后6～24h取肝脏组织，用Trizol一步法提取总RNA，用RT-PCR技术检测PXR和CYP3A11 mRNA水平。结果显示：经腹腔注射给予小鼠1.0 mg／kg的LPS处理后6h，小鼠肝脏PXR mRNA基础表达水平明显下降；LPS处理后12h，CYP3A11 mRNA基础表达水平也明显下降；LPS对PXR和CYP3A11的下调作用至少持续24h。进一步研究发现：所有剂量(0.1～5.0 mg／kg)的LPS对小鼠肝脏PXR和CYP3A11 mRNA基础表达水平均有一定的下调作用。为探讨LPS对地塞米松(DEX)、利福平(RIF)、米非司酮(RU486)和苯巴比妥(PB)诱导型CYP3A11 mRNA和红霉素N脱甲基酶(ERND)活性的影响，小鼠分别用DEX(40mg／kg i．p)、RIF(50 mg／kg，i．g)、RU486(50 mg／kg，s．c)或PB(75mg／kg，i．p)预处理3天。第4天，小鼠经腹腔注射一次给予1.0mg／kg的LPS，LPS处理后2h给予CYP3A诱导剂，LPS处理后12h和18h分别处死小鼠，用RT-PCR技术检测CYP3A11 mRNA水安徽医科大学博士学位论文平，用Nash法检测ERND活性。结果显示:LPS明显抑制DEX、RIF、RU486和PB对CYJ呀刁11 mRNA的诱导作用。这些研究结果表明:LPS对小鼠肝脏PXR和CYP3A有明显的下调作用。2.Kupffer细胞在LPS下调小鼠肝脏PXR及其靶基因CYP3A中的作用 为探讨Kupffer细胞在LPS下调小鼠肝脏PXR和CYP3An mRNA基础表达水平中的作用，经尾静脉注射1.0m留吨的三氯化札(GdCI3)以抑制小鼠肝脏KuPffer细胞功能，GdC13处理后24h经腹腔注射予1.0 mg/kg的LPS;为探讨Kupffer细胞在LPS下调小鼠肝脏诱导型C钾3An mRNA和ERND活性中的作用，小鼠用DEX(40 mg瓜9 i.p)、RIF(50 mg/kg，1.9)、RU486(50 mg/kg，s.e)或pB(75 mg瓜g，i.p)预处理3天，第3天同时经尾静脉注射1.0 mg/kg的GdC13，第4天经腹腔注射1.0 mg瓜g的LPS，LPs处理后Zh给予cYP3A诱导剂。LPs处理后第12h和第18h分别处死小鼠，用Trisof一步法提取总RNA并制备肝微粒体。用Rf-PCR检测PXR和CYP3An mRNA水平，用Nash法测定肝脏微粒体ERND活性。结果显示:LPS处理组小鼠肝脏PXR和CYP3An mRNA基础表达水平显著下降;GdC13预处理明显减弱LPS对小鼠肝脏PXR和CYP3AnmRNA基础表达水平的下调作用。进一步研究发现:LPS明显下调DEX、RIF、RU486和PB诱导的CYP3An mRNA表达水平和ERND活性;经GdC13预处理后，LPS下调诱导型CYP3An mRNA表达水平和ERND活性的作用明显减弱。这些研究结果提示:Kupffer细胞至少部分参与了LPS对小鼠肝脏PxR及其靶基因CYP3A的下调作用。3.ROS和NO在LPS下调小鼠肝脏PXR及其靶基因CYP3A中的作用 为探讨ROS在LPS下调小鼠肝脏PXR和CYP3An mRNA基础表达水平中的作用，Lps(1.0 mglkg i.p)处理前48h、24h、Zh以及LPs处理后Zh、6h，分别给予一定剂量的别嚓醇(ALL，100m岁kg，1.9.)或氯化二亚苯基碘(DPl，1.0mg/kg，s.c)，以抑制小鼠肝脏产生ROS;为探讨ROS在LPS下调小鼠肝脏诱导型eYP3Ali mRNA和ERND活性中的作用，小鼠用DEX(40 mg/kg i.p)、租F安徽医科大学博士学位论文(50mg/kg，1.9)、RU486(50 mg瓜g，s.e)或pB(75 mg/kg，i.p)预处理3天，第4天小鼠给予LpS(1.0 mg/kg i.p)和CYp3A诱导剂，LpS处理后Zh、6h分别给予ALL(100 mg/kg，1.9)或nPI(1.0 mg/kg，s.e);为探讨一氧化氮(No)在LPS下调小鼠肝脏PXR和CYP3An mRNA基础表达水平中的作用，LPS(l .0mg/kg i.p)处理前 48h、24h、Zh以及LPS处理后Zh、6h，分别经腹腔注射150m岁kg的一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基肌(AG);为探讨NO在LPS下调小鼠肝脏诱导型CYp3An mRNA和ERND活性中的作用，小鼠用DEx(40m留kgi.p)、RIF(50 mg/kg，1.9)、RU486(50 mg/kg，s.e)或pB(75 mg/kg，i.p)预处理3天，第4天小鼠给予LPS(l .0 mg瓜g，i.P)和CYP3A诱导剂， LPS处理后Zh、6h分别经腹腔注射150 mg/kg的AG。LPs处理后12h和18h分别处死小鼠，用Tr七oI一步法提取总RNA并制备肝微粒体。用Rf-PCR检测PXR和CYP3An mRNA水平，用Nash测定肝微粒体ERND活性。结果显示:经ALL或DH预处理后，LPS下调小鼠肝脏PXR和CYP3An mRNA基础表达水平以及诱导性CYP3An mRNA表达水平和ERND活性的作用明显减弱。然而，经 AG预处理后，LPS下调小鼠肝脏PXR和CYP3An mRNA基础表达水平、诱导性CYP3All mRNA表达水平以及肝脏微粒体ERND活性的作用未见明显变化。进一步研究发现:抗氧化剂N一乙酞半肤氨酸(NAc)和抗坏血酸(AA)?