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犬细小病毒病在1978年成为全球性疾病,并且从那以后在世界各地呈地方性流行(Parrish,1990; Truyen,1995)。本研究旨在获得华中地区的犬细小病毒分离株并对其基因型分型、流行病学、生物学特性及致病力进行探讨。从武汉部分宠物医院采集胶体金初检阳性的50份可疑病料,用猫肾细胞(F81)进行病毒分离,并进行电镜观察。根据犬细小病毒2型(CPV-2)保守的VP2,设计一对引物,用来鉴定CPV;参考文献(kapil et al.,2007)合成另一对引物,用来调查犬细小病毒的不同基因型的流行状况;参考CPV全序列设计扩增VP2全长的引物,并进行遗传进化分析。为了得到分离株的阅读框(ORF),又设计了四对引物。在细胞上对最先分离到的5株病毒进行空斑纯化,进行一步法生长曲线测定。最后对这5株病毒都进行动物回归实验。细胞传代结果表明,从50份病料中获得了34株犬细小病毒。PCR扩增结果表明获得390bp、583bp和1755bp三个片段。与Genbank发布的CPV-2比对后,390bp的测序结果表明我们获得的28株病毒是犬细小病毒而583bp测序的结果表明所获得的28株病毒中,有30株属于2a型,4株属于2b型。对VP2全序列进行的遗传进化分析表明,我们得到的分离株与最早分离的毒株距离最远,与欧洲、美洲的毒株距离较远,与中国分离株较近。空斑纯化及生长曲线绘制结果表明分离毒株增殖滴度可达105.5PFU/mL。通过比较同步接毒和非同步接毒所绘制的生长曲线发现,在接毒的前12小时内略微有点区别,细胞传代8小时后进行接毒的生长曲线一开始有下降趋势,接着又慢慢开始上升,而同步接毒的生长曲线从一开始接毒就是上升趋势。在一定条件下都可以凝集猪的红细胞,并且该凝集可以被犬细小病毒单克隆抗体特异性阻断。电镜观察结果表明,感染细胞的线粒体肿胀。通过PCR,我们得到了毒株3和毒株10的完整的ORFs。动物回归试验结果表明犬只都能表现不同程度的发病状况,如呕吐、排血便等。在细胞上检测,发现有排毒现象,最高排毒量可达1025/0.1mL。大体解剖发现肠管有坏死、心肌变薄。将病变的心脏制作切片观察,结果表明心肌细胞变性、坏死。本研究结果表明在华中地区,CPV-2a占据主导地位,这为我们以后的预防及治疗提供一定的理论依据;而相关的分离鉴定实验和生物特性研究则对进一步研究CPV-2的分子生物学和分子致病机理提供材料。