白蒺藜散对小鼠干眼模型的干预作用及机制研究

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目的:探究白蒺藜散对雌性C57/BL6小鼠实验性干眼模型引起眼表损伤的干预作用及作用机制。材料与方法:本实验采用智能干燥环境系统结合注射药物东莨菪碱诱导建立小鼠干眼模型,将实验小鼠分成空白对照组(N)、模型对照组(M)、白蒺藜散给药组(B)、溶剂对照组(R)、Cs A阳性药对照组(Y),每组7只小鼠均进行一般健康检查和眼科项目检查(眼周、结膜、虹膜、角膜、视盘和眼底血管),泪液分泌量检测(SIT)、泪膜破裂时间检测(BUT)、角膜荧光素钠染色实验(FL),保证参与实验的35只小鼠角膜屏障功能良好,眼前节正常。建立干眼模型周期为14天,造模第1天开始给药,给药周期为14天,第14天对各组小鼠进行角膜上皮损伤检测、SIT、BUT检测;第15天取小鼠眼球及眼睑附属器组织,制作冰冻病理切片;PAS糖原染色法检测各组小鼠结膜组织上杯状细胞的密度;HE染色法检测各组小鼠角膜上皮细胞层的厚度;Tunel凋亡法检测各组小鼠角膜和结膜上皮细胞凋亡情况;免疫荧光染色法检测各组小鼠结膜组织中CD4+T细胞的浸润情况。结果:经过白蒺藜散灌胃14天后,给药组与模型对照组相比,小鼠泪液分泌量显著增加;泪膜破裂时间延长;钴蓝光下观察到荧光素钠滞留减少,SIT、BUT、FL三项指标与模型对照组比较,均有显著性差异(P<0.05),说明白蒺藜散对角膜上皮损伤有保护作用;HE染色结果表明白蒺藜散对角膜上皮细胞层有一定的保护作用,给药组角膜上皮细胞层厚度较模型对照组有显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);PAS糖原染色结果显示白蒺藜散会减少杯状细胞的溶解和缺失,单位长度结膜组织上杯状细胞数量较模型对照组有显著性增加(P<0.05);Tunel凋亡实验证明白蒺藜散能减少干眼模型小鼠角膜上皮细胞和结膜上皮细胞的凋亡,并且与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.05);免疫荧光染色法发现经白蒺藜散灌胃治疗后小鼠结膜组织中CD4+T细胞的浸润较模型对照组有显著性减少(P<0.05)。结论:以上研究结果表明,智能干燥环境结合药物诱导方法可以建立快速且稳定的实验性小鼠干眼模型,运用该动物干眼模型经白蒺藜散灌胃给药治疗14天后,小鼠眼表上皮损伤有所减轻,结膜组织中CD4+T细胞的浸润减少,泪液分泌量增加,泪膜稳定性增加,杯状细胞缺失减少,白蒺藜散能够抑制角膜上皮细胞和结膜上皮细胞的凋亡并改善角膜屏障功能。
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