论文部分内容阅读
研究背景：近年来随着中药注射液在临床中的应用越来越广泛,过敏反应的发生也越来越多。由于中药注射液是种新兴药物,其成分复杂,并且没有完全检测出其中的各种成分以及含量,故过敏反应时有发生,其中又以Ⅰ型超敏反应最为常见和凶险。近年来,我国逐渐重视中药注射液引起的过敏反应,并且多有报道。但报道多是进行被动皮肤过敏实验(PCA)或主动皮肤过敏实验(ACA),对其评价主要以观察过敏体征为主。此方法主观性较强、难以进行量化和标准化。目的：本研究通过本实验室前期建立的豚鼠Ⅰ型超敏反应模型,对从刺五加中草药中提取的抗原物质进行检测,验证了刺五加抗原的存在及其致敏性,并通过阳性结果进一步验证了该模型的有效性。同时对中药抗原物质致敏时所需用的佐剂进行了初步的比较。方法：1.刺五加抗原的制备及蛋白含量检测：通过模拟刺五加注射液“水煮醇沉”的生产工艺,制备刺五加抗原。500g刺五加中药材切碎加水,高压煎煮,多次过滤后收集滤液,加入冰乙醇沉淀杂质,收集杂质,通过常温减压干燥回收乙醇后,得到刺五加抗原粉末6.582g。通过Bradford法检测其蛋白含量为42nμg/mg。2.过敏反应模型的建立及分组：将豚鼠分为生理盐水组(NS)、 OVA组、刺五加弗氏佐剂组(F/Ag)和刺五加铝佐剂组(AL/Ag)共4组,8只/组,各组分别免疫4次,首次免疫后每两周加强免疫一次.3.体内激发：最后一次加强免疫7天后,后肢静脉注射相应免疫原进行激发,在0-3小时内观察每只豚鼠的反应,并取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF),用ELLISA试剂盒检测过敏性介质组胺和白三烯C4(leucotriene C4, LTC4)的含量。4.体外细胞激发：最后一次加强免疫7天后,取出腹腔灌洗液和外周血分别分离肥大细胞和单个核细胞,用相应免疫原体外刺激培养30min后取上清,用ELISA试剂盒检测肥大细胞和单个核细胞中嗜碱性粒细胞(Ba)释放的过敏性介质组胺和白三烯C4的含量。结果：1.体内激发后,OVA组、刺五加弗氏佐剂组和刺五加铝佐剂组均出现明显的过敏症状,但刺五加弗氏佐剂组与刺五加铝佐剂组相比,过敏症状积分没有明显差异。2.体内激发后,BALF中组胺含量,OVA组和F/Ag组明显升高,且均与NS组有显著性差异(P<0.05)。AL/Ag组虽然组胺也有所升高,但其与NS组没有显著性差异；白三烯的含量,OVA组、F/Ag组和AL/Ag组均升高,且与NS组有显著性差异(P<0.01)。3.外周血单核细胞体外激发培养上清中,OVA组、AL/Ag组和F/Ag组组胺含量和白三烯的含量均升高,且与NS组有显著性差异(P<0.05；P<0.01)。4.腹腔灌洗液中肥大细胞体外激发培养上清中,OVA组、AL/Ag组和F/Ag组组胺含量和白三烯的含量均升高,均与NS组有显著性差异(P<0.05；P<0.01)。结论：1.刺五加抗原可诱发豚鼠Ⅰ型超敏反应,具有致敏性。在刺五加注射剂的生产中如提纯不彻底,可能会有刺五加抗原物质的残留,引起临床上过敏反应的发生。2.豚鼠Ⅰ型超敏反应模型可用于评价中药的致敏安全性。检测过敏性介质以评价中药的致敏安全性可量化,更具客观性。3.弗氏佐剂与铝佐剂应用于诱导豚鼠Ⅰ型超敏反应无明显差异,评价中药的致敏安全性也可用铝佐剂。