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目的:探究雄激素受体剪切变异体7（AR-V7）可变剪切的分子调控机制,以及剪切过程中长链非编码RNA（lnc RNA）的作用,通过干扰剪切过程,抑制AR-V7产生,从而延缓AR-V7介导的雄激素依赖性前列腺癌进展为去势抵抗性前列腺癌（CRPC）即血清睾酮达去势水平（小于50ng/d L或者小于1.7nmol/L）的进展性前列腺癌,恢复AR-V7阳性的CRPC对雄激素剥夺治疗（ADT）和雄激素受体靶向治疗（ART）即恩杂鲁胺药物的敏感性。方法:长期在无雄激素条件下培养雄激素依赖的前列腺癌细胞系LNCa P至雄激素非依赖阶段,即建立CRPC细胞系模型LNCa P-AI（androgen-independent LNCa P）,通过western blot（WB）实验验证细胞系LNCa P和LNCa P-AI中AR-V7的表达水平。基于CRPC细胞系LNCa P-AI和雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCa P的RNA芯片结果筛选出可能参与AR-V7可变剪切的剪切因子和lnc RNA;通过细胞转染、实时定量PCR（q RT-PCR）和western blot方法检测剪切因子SRSF4/7和lnc RNA CYTOR对AR-V7表达水平的影响;通过生物信息学算法分析预测及分子生物学实验蛋白质免疫共沉淀（Co-IP）、RNA电泳迁移率实验（REMSA）和RNA免疫共沉淀技术（RIP）检测剪切因子/lnc RNA/AR-V7前体m RNA（pre-m RNA）形成的剪切复合体;通过RNA原位杂交技术（RISH）检测lnc RNA和AR-V7在患者组织样本中的表达情况及两者细胞内定位;通过设计、转染反义寡核苷酸（ASO）干扰AR-V7剪切信号识别过程,验证lnc RNA在剪切过程中的调控作用;通过体外细胞实验及体内动物移植瘤模型实验,评估长链非编码RNA受抑制后是否能够增强癌细胞对ADT和雄激素受体拮抗剂药物恩杂鲁胺的敏感性,评估其潜在治疗靶点的临床应用价值。结果:1.长期在无雄激素条件下培养雄激素依赖的前列腺癌细胞系LNCa P至雄激素非依赖阶段,获得的CRPC细胞系LNCa P-AI表达较高峰度的AR-V7,而LNCa P中AR-V7 m RNA表达水平极低、蛋白水平检测不到（western blot实验结果）。2.在CRPC细胞系LNCa P-AI和雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCa P的RNA芯片结果中筛选,通过细胞转染、q RT-PCR和western blot实验,结合生物信息学分析方法,发现敲低剪切因子SRSF4和SRSF7的水平能够降低AR-V7的表达水平。3.通过RIP和REMSA实验发现剪切因子SRSF4和SRSF7能够结合到AR-V7 pre-m RNA的隐藏外显子3（CE3）内相应的剪切增强元件上,促进AR-V7 m RNA的可变剪切。4.结合SRSF4和SRSF7共表达网络分析等生物信息学方法,筛选出多个长链非编码RNA可能参与AR-V7的表达,通过小干扰RNA及慢病毒转染等实验筛选后发现改变长链非编码RNA CYTOR的表达水平,能够明显改变AR-V7的表达。5.通过RIP及Co-IP实验发现剪切因子SRSF4和SRSF7存在间接相互作用且能够与CYTOR、AR-V7 pre-m RNA结合形成剪切复合体。6.设计封闭CYTOR识别AR-V7 pre-m RNA剪切信号序列（包括AR-V7pre-m RNA内和CYTOR内的信号序列）的ASO能够有效降低AR-V7m RNA的水平。7.在本医院收集的患者石蜡包埋组织样本的检测中,通过RISH的方法,发现CYTOR与AR-V7在CRPC中表达水平显著高于良性前列腺组织和雄激素依赖性前列腺癌组织,且在新鲜CRPC组织和石蜡包埋CRPC组织中,通过PCR、q RT-PCR和RISH的方法,检测发现CYTOR与AR-V7的表达水平存在正相关。8.结合多个肿瘤组织数据库和TCGA数据库RNA测序结果,发现CYTOR在转移性CRPC患者组织中表达水平高于其他多种肿瘤,具有组织特异性,与AR-V7的特异性表达相一致。另外,基于TCGA数据库患者预后数据分析,发现CYTOR高表达的雄激素依赖性前列腺癌患者更易进展。9.体外细胞功能实验及体内动物移植瘤实验均证明,敲低CYTOR的表达水平抑制AR-V7的表达,能够使得ADT和ART雄激素受体拮抗剂恩杂鲁胺更有效的抑制CRPC细胞系LNCa P-AI、22Rv1体外培养条件下和裸鼠移植瘤体内环境下的生长。结论:在去势抵抗性前列腺癌细胞系及癌组织中,长链非编码RNA CYTOR、剪切因子SRSF4/7和AR-V7表达水平均升高,高表达的CYTOR能够识别AR-V7pre-m RNA隐藏外显子3内的剪切信号序列,并且招募剪切因子SRSF4和SRSF7结合到AR-V7 pre-m RNA隐藏外显子3内相应的剪切增强元件上,形成CYTOR/SRSF4/SRSF7/AR-V7 pre-m RNA剪切复合体,促进AR-V7 m RNA的可变剪切,增强其表达,重新激活CRPC患者雄激素受体信号通路,促进前列腺癌的进展。应用特异性ASO封闭CYTOR对AR-V7 pre-m RNA的识别能够有效干扰AR-V7 m RNA的生成。人源性组织标本数据及大样本数据库数据分析结果也证明了我们的课题假设。靶向CYTOR诱导的AR-V7可变剪切过程能够有效抑制CRPC细胞系在体外培养中及裸鼠移植瘤中AR-V7的表达,增强癌细胞对ADT和ART（恩杂鲁胺）的敏感性,缓解前列腺癌的进展,一定程度上解决治疗抵抗的难题。