鸡腹部脂肪的过度沉积已是当前肉鸡生产中亟待解决的问题之一,而至今尚未查明鸡腹部脂肪沉积的分子调控机制。本文首先以北京油鸡和科宝鸡F2资源群母鸡为试验对象,通过miRNA测序和mRNA转录组测序,并引入miRNA和mRNA联合分析方法,鉴定出与母鸡腹脂沉积相关的关键mi RNA和基因;在此基础上,整合分析mRNA转录组测序与前期全基因组关联研究(GWAS)鉴定的腹脂沉积相关的候选基因结果,发现一个共同的与腹脂沉积相关的候选基因-BNP。最后,针对BNP基因进行了系统的功能鉴定研究,通过观察BNP对脂肪细胞增殖、分化和脂肪分解的影响,从细胞水平深入探讨BNP对鸡脂肪沉积的调控作用,为揭示BNP对鸡脂代谢调控的分子机制奠定基础。试验1:鸡腹脂沉积相关基因和miRNA的鉴定及联合分析本试验以北京油鸡公鸡(中国地方鸡品种)和科宝鸡母鸡(快大型白羽肉鸡)杂交构建的F2资源群体为研究素材。在93日龄屠宰母鸡183只,测定腹脂重、全净膛重,计算腹脂率。根据腹脂重和腹脂率的表型值,选取6对具有极端(极高、极低)表型值的全同胞母鸡,提取腹脂组织总RNA,组建高、低表型组等量混合池,分别用于miRNA和mRNA高通量测序分析。分析结果表明:1)高、低表型组内的差异表达miRNA为62个,上调32个、下调30个。2)其中具有基因注释的差异表达基因是303个,上调189个、下调114个。3)对差异表达mi RNA的靶基因与差异表达基因进行联合分析,共筛选到110个交集基因,其中与脂代谢相关的18个交集基因可能是鸡腹脂沉积的重要候选基因,其中,ACSL1、SCD、PECR和FADS2可能在鸡腹脂沉积过程中起关键的调控作用。4)gga-miR-19b-3p、miR-19a-3p、miR-17-5p、miR-301b-3p和miR-215-5p等调控以上18个交集基因的miRNA,可能是影响鸡腹脂沉积的关键miRNA。5)差异基因与GWAS联合分析表明,BNP基因在北京油鸡母鸡高表型组腹脂组织中的表达极显著地高于低表型组,且BNP mRNA的表达量变化与腹脂重呈显著正相关(R2=0.79,P=0.03),提示BNP可能是鸡腹脂沉积的关键候选基因。试验2:BNP基因对鸡脂肪代谢调控的功能研究本试验以2~5周龄从北京油鸡腹部脂肪组织分离的前脂肪细胞作为体外研究模型,通过BNP基因干扰和BNP激素诱导试验,利用MTT和油红O染色方法,观察细胞增殖与分化能力变化,探索BNP对鸡脂肪代谢的调控作用。结果表明:1)在前脂肪细胞中对BNP基因进行外源干扰,干扰组前脂肪细胞的增殖和细胞分化能力显著降低(p<0.05),释放到培养基中的甘油浓度显著下降(p<0.01);2)以10-6、10-7和10-8 mol/L浓度的BNP进行诱导,在诱导24h和48h后,三个浓度梯度均促进了前脂肪细胞的增殖。以10-6mol/L浓度的BNP加至诱导分化液中诱导前脂肪细胞分化,激素诱导组脂肪细胞分化能力显著升高,脂滴沉积能力增强(p<0.05)。10-6mol/L浓度的BNP诱导分化96h,培养基中甘油浓度显著升高(p<0.01),NPR1 mRNA表达显著升高,以上结果提示,BNP可能通过上调NPR1的表达,实现对前脂肪细胞增殖、分化及脂肪细胞分解的调控作用。