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原发性肝癌（以下简称肝癌）是我国和某些亚非地区常见癌症。全球肝癌的发病率在各种癌症中排列第五。手术切除仍被公认为是治疗肝癌的最有效手段，但肝癌根治性切除术后的复发率高达60-80％，肝癌切除术后较高的复发率成为影响肝癌预后的主要障碍。目前尚缺少一种有效的方法预防肝癌术后复发转移。肝细胞癌对大多数抗癌药物敏感性差，传统的药物有5-氟脲嘧啶（5-FU）、顺铂、阿霉素（ADM）、环磷酰胺（MMC）等，疗效多在10％-20％之间。因此寻找一种高效、低毒性的药物或一种能与化疗药物联用，而减少化疗药物用量，增加疗效的药物是十分有意义的。三羟基异黄酮（Genistein）是大豆在生长过程中形成的次级代谢产物，近年来研究显示其具有显著的防治肿瘤效果。本篇论文报告：通过体外实验研究Genistein对高转移肝癌细胞株HCCLM3增殖及与转移密切相关的粘附、运动、侵袭能力的影响及相关分子机制；建立模拟人肝癌切除术后高转移复发的裸鼠模型，研究Genistein对肝癌切除术后肿瘤转移复发的影响及分子机制；通过体内体外实验研究Genistein与顺铂联用是否具有抗肿瘤增殖、复发转移的协同作用及二者协同的相关分子机制。第一部分三羟基异黄酮对HCCLM3肝癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响及机制目的：探讨Genstein对肝癌高转移细胞株HCCLM3增殖、凋亡及与肿瘤转移相关的粘附、侵袭、运动能力的影响及机制。方法：人高转移肝细胞癌细胞系HCCLM3作为研究对象，用倒置显微镜观察Genistein对肝癌细胞形态的影响；MTT法检测不同浓度Genistein对肝癌细胞生长的影响；流式细胞术检测Genistein处理后细胞凋亡率和细胞周期变化；侵袭、运动及粘附实验观察药物作用后与肿瘤转移相关的细胞粘附、运动及侵袭能力的变化；采用细胞爬片免疫细胞化学法检测Genistein对与肿瘤转移相关的血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）及上皮细胞钙粘蛋白（E-Cadherin）表达的影响。结果：（1） Genistein处理组较对照组细胞存活率降低，并且这种作用随时间和药物浓度增加更加明显；（2）对照组细胞凋亡率为10.30％，G0/G1期细胞分布为33.78％，Genistein组细胞凋亡率为13.90％，G0/G1期细胞分布为41.85％，差别均有统计学意义；（3） Genistein组细胞对Matrigel胶和FN的粘附抑制率40umol/L浓度为55.65％和45.33％，80umol/L浓度为75.16％和66.67％，在Transwell小室中的细胞相对侵袭率Genistein 40umol/L和80umol/L处理后分别为69.73％和53.59％，运动细胞相对数Genistein 40umol/L和80umol/L处理后分别为79.70％和70.17％，与对照相比差别均有统计学意义；（4）Genistein处理组MMP-2、VEGF细胞爬片免疫细胞化学染色HSCORE得分为2.13±0.11和2.45±0.16，对照组为2.44±0.23和3.08±0.16，两组间有统计学差异。结论：Genistein对HCCLM3细胞生长具有抑制作用，且具时间及浓度依赖性；Genistein使HCCLM3细胞阻滞于G0/G1期，凋亡率增加；Genistein能抑制HCCLM3细胞与肿瘤转移相关的粘附、运动和侵袭能力；其机制可能与Genistein能降低MMP-2的表达，抑制肿瘤侵袭有关，另外Genistein还能通过降低MMP-2和VEGF的表达，可能具有减少肿瘤血管生成的作用。第二部分三羟基异黄酮对裸鼠肝癌切除术后肿瘤转移复发的影响及机制目的：探讨Genistein对裸鼠肝癌切除术后肿瘤复发转移的影响及其机制。方法：建立模拟人肝癌切除术后肿瘤高转移复发的裸鼠模型，实验组给予2mg/kg Genistein溶液腹腔注射，隔日一次，共4周，观察裸鼠一般情况及肿瘤复发转移情况。肝脏复发肿瘤免疫组化检测MMP-2、TIMP-2、E-Cadherin和VEGF的表达。结果：（1）对照组裸鼠肝脏复发灶体积1917.00±647.55 mm3，肝内散播灶数量1.67±1.21个/只，肺转移为5.50±1.05个/只，转移累及其他脏器部位数为2.17±1.17个/只，Genistein处理组肝脏复发灶体积1011.88±401.14 mm3，肝内散播灶数量0.50±0.76个/只，肺转移为3.75±1.58个/只，转移累及其他脏器部位数为1.00±0.76个/只，两组差别均有统计学意义；（2）对照组肝脏复发肿瘤MMP-2和VEGF免疫组化染色HSCORE积分为2.75±0.04和2.58±0.05，Genstein组为2.56±0.19和2.43±0.04，两组有统计学差异。结论：Genistein对裸鼠肝癌切除术后复发灶的生长和肝内转移有抑制作用，对肝癌切除术后肺及其他脏器转移有抑制作用；Genistein抑制肝癌切除术后复发转移机制可能与其抑制复发肿瘤MMP-2和VEGF的表达有关系。第三部分三羟基异黄酮联合顺铂对肝癌切除术后复发转移的影响及机制目的：探讨Genistein与顺铂联用对肝癌切除术后复发转移的协同抑制作用及其机制。方法：MTT法检测不同浓度Genistein与顺铂联用对肝癌细胞HCCLM3增殖的影响，利用中效原理及公式计算中效剂量和合用指数；流式细胞术检测Genistein与顺铂联用对细胞凋亡率和细胞周期变化的影响；侵袭、运动及粘附实验观察Genistein与顺铂联用对细胞粘附、运动及侵袭能力的影响；细胞爬片免疫细胞化学法检测Genistein与顺铂联用对HCCLM3细胞VEGF、MMP-2及细胞核因子-κB（NF-κB）表达的影响；建立模拟人肝癌切除术后肿瘤高转移复发的裸鼠模型，观察Genistein与顺铂联用对裸鼠肝癌切除术后肿瘤复发转移的影响，金正均公式评价二者对肝脏复发灶和肺部转移是否有协同抑制作用；免疫组化检测Genistein与顺铂联用对肝脏复发肿瘤NF-κB、MMP-2及VEGF表达的影响；实时荧光定量PCR检测Genistein与顺铂联用对肝脏复发肿瘤MMP-2 mRNA表达的影响。结果：（1） Genistein与顺铂联用较单用组HCCLM3细胞存活率降低，Genistein与顺铂单用时的中效剂量为152.44umol/L和52.75umol/L，而两药合用时达到中效的二者浓度为59.30umol/L和14.83umol/L，Genistein、顺铂联用在低浓度起拮抗作用，当抑制率大于41.1％，即Genistein大于41.51umol/L、顺铂大于10.38umol/L时，二者合用可产生协同作用；（2） Genistein与顺铂联用组HCCLM3细胞凋亡率为67.30％，G0/G1期分布细胞为93.88％，Genistein单用组细胞凋亡率13.90％，G0/G1期分布细胞41.85％，顺铂组细胞凋亡率为48.54％，G0/G1期分布细胞63.95％，联用与单用有统计学差异。（3） Genistein与顺铂联用对Matrigel胶和FN细胞粘附抑制率与Genistein单用组相比无统计学差异，相对侵袭率和运动细胞相对数也无统计学差异；（4）HCCLM3细胞顺铂处理组MMP-2、NF-ΚB HSCORE得分为2．78±0．19和2．95±0．08，联用组为2．12±0．31和2．46±0．07，对照组为2．44±0．23和2．79±0．06，三组间均有统计学差别；（5）与单用Genistein及顺铂比较，二者联用裸鼠肝脏复发灶体积减小，肺转移数减少，用金正均公式来计算Geni stein与顺铂联用对裸鼠术后肝癌复发灶体积和肺转移抑制的q值分别为1．09和1．55；（6）顺铂处理组裸鼠复发肿瘤NF-ΚB、MMP-2免疫组化染色HSCORE得分为2．98±0．04和3．00±0．04，联用组为2．38±0．03和2．47±0．10，对照组为2．51±0．04和2．75±0．04，三组间均有统计学差别；（7）实时荧光定量PCR检测顺铂组MMP-2 mRNA表达是对照组的2．06倍，Genistein与顺铂联用组是对照组的0．44倍。结论：本部分实验结果表明在体外Genistein与顺铂联用随着浓度增加二者对HCCLM3细胞增殖具有协同抑制作用；Genistein与顺铂联用较单用诱导HCCLM3细胞凋亡作用更明显，主要引起细胞G0/G1期阻滞；Genistein与顺铂联用对HCCLM3细胞体外粘附、侵袭及运动能力抑制较单用Genistein无明显增强：Genistein与顺铂联用在体内对裸鼠肝癌切除术后的肿瘤复发灶具有相加抑制作用，对裸鼠肝癌切除术后肺转移具有协同抑制作用；Genistein与顺铂联用对肝癌切除术后复发转移抑制的协同机制可能在于Genistein能降低顺铂诱导的NF-ΚB升高，增加肿瘤细胞凋亡，抑制增殖，同时Genistein也能抑制可能是NF-ΚB升高后造成的MMP-2表达增加。