二次谐波显微镜在颞下颌关节盘疾病中的研究

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颞下颌关节是生物体最复杂的部位之一,作为颞下颌关节盘的主要成分,胶原纤维的有序排列有助于维持颞下颌关节的正常功能,失去协调的颌关节运动与胶原纤维的弯曲和结构的改变有关。通过观察关节盘中胶原纤维走向以及量化胶原纤维的紊乱程度可以诊断与组织损伤有关的关节病症。本文介绍了几种表征胶原纤维的方法,在可视化和评价胶原纤维方面做出了论述。本文介绍了影像学检查方法,然后基于新西兰大白兔颞下颌关节盘的冷冻切片,进行了组织学染色实验。分析其弊端之后,提出了一种非线性光学的方法,能够无损、实时、高分辨率地成像颞下颌关节盘胶原纤维。本文首先获取了全部入射角度偏振光的关节盘横纵切面二次谐波生成(Second harmonic generation,SHG)图像,得到胶原纤维的全部细节,纤维的分布以亮度深浅表示;然后将不同角度SHG图像的强度叠加,最后将单色图像赋予不同的色彩。同单一方向的SHG图像对比得,全角度叠加图像可以更准确地区分健康与损伤的关节盘,可以更加快捷高效地分析胶原纤维紊乱程度;进行彩色图像的叠加能够使胶原纤维细节效果更显著,增加胶原纤维图像的可视化程度。本文依据上述分析方法提出了一种颞下颌关节盘健康指数的胶原纤维紊乱程度评价:使用快速傅里叶变换(Fast Fourier Transform,FFT)对胶原纤维的紊乱程度进行量化,直观地以表征胶原纤维各个方向排列的无序性。这个健康指数可以有效地表达颞下颌关节盘的健康状况和胶原纤维的紊乱程度,为颞下颌关节盘病变阶段的组织表征提供客观的分析工具和方法。本文还探索了整块颞下颌关节盘的扫描电镜,并使用SHG显微镜,对未切片的颞下颌关节盘进行三维成像,以期该成像技术可以应用在活体动物乃至人体医疗。本文对胶原纤维进行三维成像的研究方法可用于分析关节盘的生物特性,也针对未来可能出现的微创手术的临床应用做一些前瞻性探索。
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