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目的以去卵巢大鼠为骨质疏松症动物模型,观察五味子总木脂素对其的作用;并从对骨代谢具有重要调节作用的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-11(IL-11)的角度,部分揭示其作用机理,为五味子总木脂素应用于治疗骨质疏松症提供实验依据。方法选用雌性SD大鼠92只,体重210±20g,SPF级,按体重随机分3组,空白对照组12只,假手术组12只,造模组68只。运用戊巴比妥钠45mg/kg对造模组大鼠进行麻醉后,摘除双侧卵巢;假手术组只摘除卵巢周围的少许脂肪组织,不切除卵巢。手术过程中有1只大鼠死亡。术后3周,再将造模组67只大鼠按体重随机分为5组:模型组12只;阳性对照组14只;五味子总木脂素小剂量组13只,中剂量组14只,大剂量组14只。分组后,开始对各给药组大鼠灌胃给药:五味子总木脂素小、中、大剂量组分别给予浓度为8.05mg/ml、16.1Omg/ml和32.20mg/ml的五味子总木脂素混悬液,给药体积为12ml/kg体重,给药剂量分别为96.6 mg/kg体重、193.2 mg/kg体重和386.4 mg/kg体重。阳性对照组灌胃给予浓度为0.015mg/ml的戊酸雌二醇(E2)溶液,给药体积为12ml/kg体重,给药剂量为0.18mg/kg体重。以上各组大鼠给药,每天1次,连续6天,休息1天后,再给药6天,如此给药13周。每周称体重一次,据此调整给药剂量。空白对照组、假手术组、模型组按上法灌胃给予等体积的1.07%吐温溶液。给药结束后,各组大鼠用45mg/kg剂量的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,处死各组大鼠之后,取左侧股骨运用 Skyscanl 174 X-Ray Microtomograph(micro-CT)进行骨组织形态指标检测,取右侧胫骨,制作脱钙冰冻切片,用于IL-6、IL-11蛋白及mRNA表达检测。实验结果皆以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS 20.0统计软件进行统计学处理。若数据为正态分布,则采用单因素方差分析进行处理:方差齐性的,组间两两比较采用LSD检验;方差不齐的则采用Dunnett’sT3检验。非正态分布的数据,采用Kruskal-Wallis 1-way ANOVA(k samples)进行检验:组间两两比较,采用 Stepwise step-down 法。结果1五味子总木脂素对去卵巢大鼠股骨组织形态指标的影响1.1五味子总木脂素对去卵巢大鼠股骨骨体积分数(BV/TV)的影响与假手术组比较,模型组、阳性对照组以及五味子总木脂素小、中、大剂量组大鼠股骨BV/TV均显著减少。与模型组比较,中剂量组、大剂量组和阳性对照组的BV/TV均显著增加;而小剂量组则无显著性变化。三个剂量组之间比较,中剂量组、大剂量组的BV/TV明显高于小剂量组;大剂量组与中剂量组比较,无显著性差异。1.2五味子总木脂素对去卵巢大鼠股骨骨小梁数量(Tb.N)的影响模型组、阳性对照组以及五味子总木脂素小、中、大剂量组大鼠股骨Tb.N显著少于假手术组。中剂量组、大剂量组和阳性对照组与模型组比较,Tb.N均显著增多;小剂量组与之比较,无显著性变化。三个剂量组之间比较,中剂量组、大剂量组与小剂量组比较,Tb.N显著增多;大剂量组与中剂量组比较,无显著性差异。1.3五味子总木脂素对去卵巢大鼠股骨骨小梁厚度(Tb.Th)的影响模型组、阳性对照组以及五味子总木脂素小、中、大剂量组与假手术组比较,大鼠股骨Tb.Th均显著减少。与模型组比较,中剂量组、大剂量组以及阳性对照组的Tb.Th显著增加;而小剂量组无显著性变化。三个剂量组之间比较,中剂量组、大剂量组的Tb.Th较小剂量组显著增加;大剂量组与中剂量组比较,无显著性差异。1.4五味子总木脂素对去卵巢大鼠股骨骨小梁分离度(Tb.SP)的影响与假手术组比较,模型组、阳性对照组以及五味子总木脂素小、中、大剂量组大鼠股骨Tb.SP均显著增加。中剂量组、大剂量组以及阳性对照组与模型组比较,Tb.SP显著减少;小剂量组与之比较,无显著性变化。三个剂量组之间比较,中剂量组、大剂量组的Tb.SP均明显少于小剂量组;大剂量组与中剂量组比较,无显著性差异。1.5五味子总木脂素对去卵巢大鼠股骨结构模型指数(SMI)的影响模型组、阳性对照组以及五味子总木脂素小、中、大剂量组大鼠股骨SMI较假手术组明显增加。与模型组比较,中剂量组、大剂量组和阳性对照组的SMI明显减少;而小剂量组无显著性差异。三个剂量组之间比较,中剂量组、大剂量组与小剂量组比较,SMI均明显减少;大剂量组与中剂量组比较,无显著性差异。2五味子总木脂素对去卵巢大鼠胫骨骨髓中IL-6蛋白及其mRNA表达的影响与假手术组比较,模型组、五味子总木脂素小剂量组大鼠胫骨骨髓中IL-6蛋白及其mRNA表达IOD(积分光密度)均显著增高;而中剂量组、大剂量组和阳性对照组的IL-6蛋白表达IOD无显著差异;中剂量组的IL-6mRNA表达IOD显著增高,但大剂量组和阳性对照组的IL-6 mRNA表达IOD无显著性差异。与模型组比较,中剂量组、大剂量组和阳性对照组的IL-6蛋白及其mRNA表达IOD均明显降低;小剂量组的则均无显著性差异。三个剂量组之间比较,中剂量组、大剂量组的IL-6蛋白及其mRNA表达IOD均明显低于小剂量组;大剂量组与中剂量组比较,无显著性变化。3五味子总木脂素对去卵巢大鼠胫骨骨髓中IL-11蛋白及其mRNA表达的影响与假手术组比较,模型组、五味子总木脂素小、中剂量组大鼠胫骨骨髓中IL-11蛋白及其mRNA表达IOD均明显增高;大剂量组的IL-11蛋白表达IOD明显增高,而其mRNA表达IOD无显著性差异;阳性对照组的IL-11蛋白及其mRNA表达IOD均无显著性差异。中剂量组、大剂量组以及阳性对照组的IL-11蛋白及其mRNA表达IOD均低于模型组;小剂量组与之比较均无显著性差异。三个剂量组之间比较,中剂量组、大剂量组的IL-11蛋白及其mRNA表达IOD均较小剂量组显著降低;大剂量组与中剂量组比较,均无显著性变化。结论(1)切除大鼠卵巢可使其股骨BV/TV、Tb.Th和Tb.N显著减少,使Tb.SP和SMI显著增加;而五味子总木脂素可使以上指标在一定程度上发生逆转。表明五味子总木脂素对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症具有治疗作用。(2)五味子总木脂素可使去卵巢所致的大鼠骨髓中增强的IL-6和IL-11蛋白表达减弱,表明该药可通过抑制骨髓中IL-6和IL-11的合成和分泌而达到治疗骨质疏松症的作用。