山苦菜组织培养及高效再生体系建立的研究

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山苦菜[Ixeris chinensis (Thunb.)Nakai],属菊科,苦荬菜属多年生草本植物。由于其具有重要的食用和药用价值,人们对之非常亲睐。野生资源已不能满足需要,人工栽培速度亦较慢,故寻求山苦菜快速繁殖的方法尤为重要。本研究通过诱导山苦菜愈伤组织再分化及山苦菜直接分化两种途径成功地建立了山苦菜高效再生体系,具体结果:1.愈伤组织诱导、继代及分化(1)愈伤组织诱导:以山苦菜茎段为材料,采用平放和斜插的方式培养,成功得到结果:最佳培养基为恒温光照条件下的MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+蔗糖30g.L-1,且平放的嫩茎诱导效果较好,诱导率达到100%。(2)愈伤组织继代:MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+蔗糖30g.L-1是愈伤组织继代的最佳培养基;在恒温光照、恒温无光和变温光照下进行愈伤组织继代培养,30d后的增殖倍数分别为25.2倍、12.7倍和9.8倍,恒温光照是山苦菜愈伤组织继代的最佳条件。(3)愈伤组织分化:愈伤组织分化最佳培养基是恒温光照条件下1/2MS+蔗糖15g.L-1,分化率为100%,平均每块分化出5.6个不定芽,平均苗长达到1.2cm。2.不同材料及条件对山苦菜直接分化的影响分别以山苦菜茎尖、叶片、叶柄和茎段为外植体,直接诱导不定芽。结果表明:茎段为理想材料,最佳培养基为MS+BAO.5mg·L-1+IBA0.5mg·L-1+KT0.5mg·L-1+蔗糖30g.L-1,分化率达100%,平均每个茎段分化出56个高度为2.1-3.4cm的直接分化芽。3.不同条件对分化芽生根的影响不同条件下分化芽生根的结果证明:1/4MS+IAA0.2mg·L-1+蔗糖20g.L-1是山苦菜分化芽生根的理想培养基,恒温光照条件下生根效果最好,在3种接种方式中以正插生根效果最佳,生根率达100%,平均每株试管苗生根7.6条、每条根的平均长度4.22cm。4.试管苗生根培养的增殖试管苗生根继代培养25d后,试管苗成活率和生根率均为100%,平均增殖倍数达到了4.8倍,且生根情况较理想,几乎没有无效苗。按此速度,理论上1株试管苗1年能繁殖出4.814.6(约为8.8x105万)株试管苗。5.炼苗、移栽与定植山苦菜再生苗移栽的理想基质是1/2园土+1/2河沙,移栽成活率为96.5%,定植的成活率为99%。定植成活的试管苗生长非常旺盛,并保持了山苦菜的所有生物学性状。
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