5-Aza-cdR增效丝裂霉素对膀胱癌T24细胞化疗作用的实验研究

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【目的】研究5-Aza-cdR增加丝裂霉素对膀胱癌T24细胞化疗效果【方法】丝裂霉素(0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.05mg/ml)和5-Aza-cd R(0、0.25、0.5、1、5、10umol/L)处理膀胱癌T24细胞48小时,各组细胞均使用MTT检测增殖,选取增殖抑制明显的丝裂霉素浓度完成进一步试验。用相同浓度的丝裂霉素(0.01mg/ml)和5-Aza-cd R(0、0.25、0.5、1、5、10umol/L)处理膀胱癌T24细胞48小时,1组为对照组(未加丝裂霉素和5-Aza-cdR),2组为仅加丝裂霉素0.01mg/ml,3-7组为不同浓度的5-Aza-cdR与丝裂霉素联合使用。各组细胞均使用流式细胞学检测细胞凋亡,western blot检测P-gp、MRP蛋白表达。所有试验结果均重复3次。【结果】MTT检测T24细胞增殖,与单用丝裂霉素组和合用不同浓度5-Aza-cdR的各组比较,两药合用对膀胱癌T24细胞的A值差异均有统计学意义(P<0.01),相对抑制率IR%差异均具有统计学意义(P<0.01),两药合用对膀胱癌T24细胞的生长抑制明显提高,呈协同效应且与5-Aza-cd R浓度有依赖性。不同浓度丝裂霉素与相同浓度5-Aza-cd R的各组比较,膀胱癌T24细胞的A值差异均有统计学意义(P<0.01),显示丝裂霉素浓度也有依赖性。选取丝裂霉素浓度为0.01mg/ml,与不同浓度5-Aza-cdR培养48小时,用流式细胞学检测细胞凋亡,各组细胞凋亡率分别为:3.23±0.08%、4.85±0.04%、8.81±0.06%、14.26±0.11%、21.14±0.05%、28.46±0.04%、38.17±0.07%,单用丝裂霉素组和合用不同浓度5-Aza-cdR的各组比较,细胞凋亡逐渐增加,各组与对照组比较均有统计学意义(P<0.01)。用Western Blot检测P-gp蛋白,各样本的IOD值为:451.71±0.08、416.27±0.09、315.42±0.17、214.03±0.14、174.71±0.23、80.519±0.14、38.322±0.19;检测MRP各组IOD值为:438.73±0.05、388.59±0.08、322.53±0.13、260.82±0.17、227.53±0.04、163.41±0.10、128.23±0.21。结果显示各组细胞P-gp、MRP蛋白表达逐渐下降,各组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】5-Aza-cdR与丝裂霉素联合使用可抑制膀胱癌T24细胞的增殖、促进癌细胞凋亡、明显下调肿瘤耐药相关蛋白(P-gp、MRP)的表达,且与5-Aza-cdR有明显浓度依赖性。
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