实验目的探索RNA表观遗传调控在丙戊酸钠治疗颞叶癫痫中的潜在机制,为癫痫的精准治疗提供新线索。实验方法1.使用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导制作颞叶癫痫大鼠模型。2.癫痫组与正常组大鼠脑组织的iTRAQ蛋白组学分析,寻找表达差异的蛋白。3.观察并统计大鼠自发性发作(SRS),水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力。4.尼氏染色与银染色分别观察海马神经元损伤及苔藓纤维芽生情况。5.Western blot检测脑组织中甲基化转移酶、去甲基化酶及差异蛋白的表达水平。6.通过MeRIP-qPCR检测脑组织中差异蛋白mRNA的m~6A修饰表达。实验结果1.iTRAQ蛋白组学分析提示影响突触可塑性的相关蛋白如Cofilin-1等表达上调。2.VPA治疗后可明显减少癫痫大鼠的自发性发作(SRS),可改善癫痫大鼠的学习记忆能力的缺陷。3.尼氏染色可见:VPA治疗后可明显改善癫痫大鼠海马CA1与CA3区的细胞脱失及结构破坏现象,银染色发现VPA治疗后可使癫痫大鼠海马中苔藓纤维发芽增多现象得到明显抑制,使异常的突触生长减少。4.癫痫组在mRNA表达正常的情况下,其Cofilin-1蛋白表是升高的。而VPA治疗后可降低Cofilin-1蛋白的表达。5.癫痫组大鼠脑组织中Cofilin-1 mRNA的515位点存在m~6A高甲基化修饰,而丙戊酸钠治疗后该修饰有明显的降低。6.各组中甲基转移酶复合物中METTL3、METTL14表达无明显变化。癫痫组中去甲基化酶FTO较正常组显著下降,VPA治疗后增多。结论1.颞叶癫痫大鼠脑组织中的Cofilin-1 mRNA的515位点存在m~6A高甲基化修饰,可影响mRNA的翻译过程,使Cofilin-1的蛋白表达增高,后者与突触可塑性有关,参与癫痫的发生发展。2.VPA可通过FTO介导参与RNA表观遗传修饰调控,发挥抗癫痫作用。