染料脱色功能菌群筛选及其DGGE指纹图谱分析

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随着染料和印染工业的迅速发展,大量人工合成的色度高、难降解以及对生物有毒性污染物质的排放,对环境以及人类健康造成了严重的威胁。混合菌群较单一菌株在染料废水处理中具有效果稳定、降解染料彻底等优点。因此筛选和研究具有优良脱色性能混合菌群将为染料废水生物处理工程应用提供理论基础。本文利用梯度浓度压力驯化法,从印染废水处理系统的厌氧反应器中筛选出对直接红28、直接黄12、活性艳蓝KN-R、活性翠兰KN-G、活性黑5以及其混合染料具有良好脱色能力的混合菌群RTZ-1、RTZ-2、RTZ-3、RTZ-4、RTZ-5、RTZ-6,针对其染料脱色性能、脱色机理及菌群结构进行了一系列研究。研究了混合菌群RTZ-1、RTZ-2、RTZ-3、RTZ-4、RTZ-5、RTZ-6分别对直接红28、直接黄12、活性艳蓝KN-R、活性翠兰KN-G、活性黑5以及其混合染料的脱色效率。结果表明,混合菌群RTZ-6对初始染料浓度为200mg/L的混合染料,在35℃、pH=7.0的条件下,静置培养24h,测定其平均脱色率为38.9%,连续培养一年以后其脱色效果依然非常稳定;混合菌群RTZ-1对初始染料浓度为200mg/L的直接红28进行降解,在上述条件下,48h后其脱色率均稳定在90%以上,脱色效果最高达96.16%;混合菌群RTZ-2对初始染料浓度为200mg/L直接黄12进行降解,48h后其脱色率均稳定在90%以上,脱色效果最高达93.9%;混合菌群RTZ-3对初始染料浓度为50mg/L的活性艳蓝KN-R进行降解,48h后其脱色率均稳定在70%以上,脱色效果最高达71.8%;混合菌群RTZ-4对初始染料浓度为50mg/L的活性翠兰KN-G进行降解,48h后其脱色率均稳定在60%以上,脱色效果最高可达68.2%;混合菌群RTZ-5对初始染料浓度为50mg/L的活性黑5进行降解,48h后其脱色率均稳定在80%以上,脱色效果最高可达86.3%。对其中脱色效率较高的两种混合菌群进行了脱色性能研究。功能菌群RTZ-1对染料浓度为200mg/L的直接红28降解,在pH=7.0,温度为45℃,盐度为2mmol/L条件下降解率达到最高,为96%左右。功能菌群RTZ-2对染料浓度为200mg/L的直接黄12降解,在pH=6.0,温度为35℃,盐度为2mmol/L条件下降解率达到最高,为93%左右。通过GC-MS技术对5种染料直接红28、直接黄12、活性艳蓝KN-R、活性翠兰KN-G、活性黑5的48h降解产物进行检测。所得色谱图与标准质谱库对比,分别得到如下物质。直接红28的48h降解产物为3,4-二羟基苯甲酸、3-(4-羟基苯基)乳酸;直接黄12的48h降解产物为间甲苯胺、对氨基苯酚、酪醇;活性艳蓝KN-R的48h降解产物为DL-丙氨酸、D-α-羟基异缬草酸、对羟基苯乙醇、邻苯二甲酸;活性翠兰KN-G的48h降解产物为乳酸、对羟基苯乙醇;活性黑5的48h降解产物为丙氨酸、3-羟基丁酸、DL-缬氨酸、(R)-(-)-2-羟基-2-苯基丙酸、邻氨基苯甲酸。最后,通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)混合菌群RTZ-1、RTZ-2、RTZ-3、RTZ-4、RTZ-5、RTZ-6的群落结构进行解析,分析其DGGE指纹图谱。六种混合菌群均存在微生物A属于链球菌属(Streptococcusdidelphis strain)和微生物B属于伯克氏菌属(Burkholderia sp.),二者分别属于芽孢杆菌纲(Bacilli)和β-变形菌纲(Beta-proteobacteria)。可见链球菌属(Streptococcus didelphis strain)、伯克氏菌属(Burkholderia sp.)均可降解五种染料的混合染料,以及五种单一染料,并且能在其中存活。而克雷白氏杆菌属(Klebsiella sp.)属于γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria),在混合菌群RTZ-4中为主要功能菌属,可见克雷白氏杆菌属(Klebsiella sp.)对降解酞菁类染料起到重要作用。
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