背景与目的:1.蛋白质岩藻糖基化在子宫内膜对胚胎的接受能力方面发挥重要作用。2.岩藻糖基转移酶Ⅳ(FUT4)在哺乳动物子宫内膜上皮细胞中呈阶段特异性表达,因此被作为评价子宫内膜接受态的一个重要指标。3.micro RNAs是一种内源性非编码小分子RNA,miR-200c是miR-200家族的成员之一,在人类生殖过程中发挥作用。但是,miR-200c与FUT4的关系以及其在子宫内膜接受态的建立过程中的作用未见报道。4.本研究旨在探讨miR-200c对子宫内膜接受态的建立、胚胎着床的影响及其作用机制,阐述miR-200c对哺乳动物胚胎着床过程的调控作用。方法:1.通过Real-time PCR,Western blot,ELISA检测正常未孕、不孕症、正常早孕、流产患者血清中miR-200c、FUT4的表达。2.CCK8、平板克隆形成实验和细胞体外黏附实验检测miR-200c对细胞增殖及接受胚胎能力的影响。3.双荧光素酶基因报告实验验证FUT4是否是miR-200c的靶基因。4.通过Wnt/β-catenin信号通路进一步研究miR-200c对胚胎着床的调控作用。结果:1.PCR、ELISA和Western blot方法检测结果显示:不孕症患者血清中miR-200c的表达比正常未孕女性高,流产患者血清中miR-200c的含量比正常早孕女性血清中高,具有显著性差异(*p<0.05;***p<0.001)。不孕症患者血清中FUT4的表达比正常未孕女性低,流产患者血清中FUT4的含量比正常早孕女性血清中低,具有显著型差异(**p<0.01;***p<0.001)2.miR-200c抑制细胞增殖和胚胎黏附功能。CCK-8实验连续5天记录细胞的生长情况。转染miR-200c mimics细胞组的生长速度显著慢于对照组细胞,而转染Anti-miR-200c后,细胞的增殖能力显著高于对照组。平板克隆形成实验结果显示,miR-200c mimics转染组细胞的克隆形成数低于对照组,而转染Anti-m R-200c细胞组细胞的克隆形成数显著高于对照组,差异存在统计学意义(**p<0.01;***p<0.001)。细胞体外黏附实验结果显示,转染miR-200c mimics细胞组的黏附能力显著低于对照组,转染Anti-miR-200c细胞组的黏附能力显著高于对照组,差异存在统计学意义(*p<0.05)。3.FUT4是miR-200c的靶基因。通过软件预测发现miR-200c与FUT4存在结合位点,因此我们构建了相应荧光素酶载体,同时构建了相应的突变型载体,与miR-200c mimics共同转染进入RL-95细胞中。转染miR-200c mimics与荧光素酶载体的RL95-2细胞中,FUT4的荧光素酶活性低于对照组(*p<0.05);转染miR-200c mimics与荧光素酶载体的RL95-2细胞中FUT4的荧光素酶活性与转染突变型载体组FUT4的荧光素酶活性不存在统计学差异。Western blot结果显示miR-200c mimics转染后可显著下调FUT4的表达,当与FUT4 c DNA共转染后,又可以回调FUT4的表达。Anti-miR-200c转染后可显著上调FUT4的表达,当与FUT4 si RNA共转染后可回调FUT4的表达。细胞免疫荧光染色得到了相同的结果,miR-200c可下调FUT4的表达。4.miR-200c通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活影响子宫内膜细胞的功能。转染miR-200c可抑制p-GSK3β、β-catenin的表达,其结果与使用Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK的效果一致,当与FUT4 c DNA共转染后可重新激活p-GSK3β、β-catenin的表达。当Anti-miR-200c抑制miR-200c的表达后可激活p-GSK3β、β-catenin的表达,与FUT4 si RNA共转染后可重新抑制p-GSK3β、β-catenin的表达。结论:1.miR-200c可由血清检测,其表达量与FUT4呈负相关。2.抑制miR-200c表达可改善人内膜细胞RL95-2和胚胎细胞JAR之间的黏附。3.miR-200c对FUT4具有靶向调控作用。4.miR-200c通过靶向FUT4,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,抑制子宫内膜接受态的建立。