论文部分内容阅读
背景:心肺复苏成功后神经系统功能完好的患者仅占1.4%,大多数患者死于心肺复苏后全脑缺血缺氧性神经功能损伤。多项研究发现远程缺血处理对心、脑、肾等众多器官的缺血/再灌注损伤具有保护作用,对心肺复苏后的神经功能恢复亦有促进作用。远程缺血处理的方式主要有远程缺血前处理、远程缺血中处理和远程缺血后处理。这三种方式远程缺血处理在心肺复苏后的神经功能保护效果是否有差异,以及其具体保护机制尚不清楚。神经元细胞大量凋亡是心肺复苏后神经功能损伤的主要原因,减少神经元细胞凋亡是降低心肺复苏后神经功能损伤的重要措施。而线粒体膜通透性转化孔通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放程度的调节在神经元细胞凋亡途径中起着核心作用。本研究观察三种方式远程缺血处理对心肺复苏大鼠的脑保护作用,及其对大鼠海马神经元细胞凋亡和海马神经元细胞mPTP开放程度的影响,研究可能的保护机制。第一部分三种方式远程缺血处理对心肺复苏大鼠脑保护效果比较目的:观察不同方式远程缺血处理对心肺复苏大鼠心肺复苏成功率、生存率及复苏后各时间点神经功能缺损评分(neurological deficit scores,NDS)的影响。方法:根据改良Utstein模式建立大鼠窒息法心脏骤停-复苏模型。SD大鼠,75只,随机分为空白对照组、未处理组、远程缺血前处理组、远程缺血中处理组和远程缺血后处理组(n =15)。阻断/松开左侧股动脉完成远程缺血处理。观察各组大鼠心肺复苏成功率、生存率及复苏后NDS评分。结果:远程缺血前处理组NDS评分在心肺复苏后48h、72h较未处理组、中处理组显著提高(P<0.01)。远程缺血后处理组NDS评分在心肺复苏后48h、72h较未处理组、中处理组显著提高(P<0.01)。远程缺血中处理组NDS评分在心肺复苏后72h较未处理组轻度提高(P<0.05)。结论:远程缺血前处理、远程缺血后处理可显著提高大鼠心肺复苏后NDS评分,其神经功能保护效果优于远程缺血中处理。第二部分远程缺血处理对心肺复苏大鼠海马神经元细胞凋亡及mPTP的影响目的:观察不同方式远程缺血处理对心肺复苏大鼠海马神经元细胞凋亡以及海马神经元细胞mPTP开放程度的影响,研究远程缺血处理脑保护的机制。方法:根据改良Utstein模式建立大鼠窒息法心脏骤停-复苏模型。SD大鼠,75只,随机分为空白对照组、未处理组、远程缺血前处理组、远程缺血中处理组和远程缺血后处理组(n =15)。阻断/松开左侧股动脉完成远程缺血处理。心肺复苏后72h,Western Blot法测定海马凋亡蛋白bcl-2、Bax、caspase-3表达水平,末端转移酶标记法(TUNEL)及流式细胞仪法测定海马神经元细胞凋亡率,流式细胞仪法测定海马神经元细胞mPTP开放程度,并测定海马神经元细胞线粒体内外膜完整性。结果:远程缺血前处理组、远程缺血后处理组海马神经元细胞凋亡率较未处理组及远程缺血中处理组降低(P<0.05)。远程缺血前处理组、远程缺血后处理组海马神经元细胞线粒体内外膜完整性较未处理组及远程缺血中处理组增高(P<0.05)。前处理组、远程缺血后处理组海马神经元细胞mPTP开放程度较未处理组、远程缺血中处理组显著降低(P<0.01)。结论:远程缺血前处理、远程缺血后处理的心肺复苏后神经功能保护机制与阻断mPTP开放,减少海马区神经元细胞凋亡相关。第三部分mPTP阻断剂与远程缺血后处理对心肺复苏大鼠脑保护效果比较及机制研究目的:比较mPTP阻断剂环孢霉素A(CyclosporinA,CsA)、远程缺血后处理单独或联合使用对心肺复苏大鼠的神经保护作用,并研究其机制。方法:建立大鼠窒息法心脏骤停-复苏模型。SD大鼠,60只,随机分为对照组、远程缺血后处理组、CsA组、联合组(n=15)。远程缺血后处理组通过阻断/松开左侧股动脉完成远程缺血处理;CsA组在心肺复苏成功后予以单次剂量的CsA静注;联合组则结合了上述两项干预措施。测定大鼠心肺复苏后NDS评分;心肺复苏后72h通过HE染色及电镜法观察海马区神经元细胞及线粒体形态学变化;TUNEL及流式细胞仪法测定大鼠海马神经元细胞凋亡率;并测定各组大鼠海马神经元细胞mPTP开放程度的变化。结果:远程缺血后处理组、CsA组、联合组心肺复苏后48h、72hNDS评分较对照组显著提高(P<0.01),联合组心肺复苏后72hNDS评分较CsA组提高(P<0.05);远程缺血后处理组、CsA组、联合组心肺复苏后海马神经元细胞凋亡率较对照组显著降低(P<0.01),这三组中以联合组海马神经元细胞凋亡率最低;HE染色以及电镜线粒体显微结构观察均显示联合组具有更好的神经细胞保护作用;mPTP开放程度方面,远程缺血后处理组较CsA组开放程度显著增高(P<0.01),联合组与CsA组相比无差异(P>0.05)。结论:CsA联合远程缺血后处理对心肺复苏大鼠具有更好的神经保护作用。抑制mPTP开放是远程缺血后处理发挥其心肺复苏后神经功能保护的机制之一,但不是唯一机制。第四部分液体输注对心肺复苏大鼠海马神经元细胞凋亡的影响目的:前期造模实验中发现,大鼠心肺复苏后存在低血压期。本研究观察不同类型液体输注对大鼠心肺复苏后血流动力学及海马神经元细胞凋亡的影响。方法:建立大鼠窒息法心脏骤停-复苏模型。SD大鼠,60只,随机分为对照组、生理盐水(NS)组、高渗盐水(HS)组以及羟乙基淀粉(HES)组(n =15)。心肺复苏期分别予以生理盐水、高渗盐水或羟乙基淀粉持续输注。观察不同组别大鼠心肺复苏成功率、生存率及NDS评分;HE染色观察大鼠海马神经元细胞形态变化;Western Blot法检测大鼠海马凋亡相关蛋白bcl-2、Bax、caspase-3的表达水平;TUNEL及流式细胞仪法测定大鼠海马区神经元细胞凋亡率。结果:HS组心肺复苏后12、24、48、72小时NDS评分均较NS组、HES组增高(P<0.05);HS组HE染色结果提示大鼠海马神经元细胞排列稍显紊乱,中等量变性的神经元细胞,可见细胞轻中度水肿,较NS组及HES组改善;HS组bcl-2表达水平较NS组、HES组显著增高(P<0.01),Bax、caspase-3表达水平较NS组、HES组显著降低(P<0.01);HS组海马神经元细胞凋亡率较NS组及HES组下降(P<0.05)。结论:心肺复苏期高渗盐水持续输注可减少大鼠海马神经元细胞凋亡,改善心肺复苏后NDS评分。