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湖南长沙简牍博物馆收藏了一批走马楼出土的三国时期吴国竹简,具有极为珍贵的史料价值。在出土后保存过程中,该批竹简暴发了竹简蚀斑病,竹简竹体被微生物侵蚀,其中的木质素、纤维素被某种或者某群微生物所降解,蚀斑中的竹简竹体变为半透明膜状物质,并且容易破裂脱落。本研究以该批爆发蚀斑病的竹简浸泡液为原料,采用适于各种微生物生长的不同的丰富培养基分离纯化其中的可培养微生物,共分离得到9株可培养菌株的纯培养,其中8株细菌,1株霉菌。结合培养特征、形态特征和基于细菌16S rDNA和真菌18S rDNA、ITS基因序列的系统发育分析,将8株细菌分别划归为4个纲(α-Proteobacteria、β-Proteobacteria、γ-Proteobacteria、Bacilli)的7个属(Bacillus、Acinetobacter、Staphylococcus、Pandoraea、Novosphingobium、Cupriavidus以及Comamonas);霉菌属于Aspergillus。利用木质素磺酸钠为唯一碳源的固体平板培养基,从三国吴简腐蚀竹简浸泡液分离到的9株菌种中初步筛选出7株具有木质素降解潜力的菌株,其中6株细菌分别为Acinetobacter sp.B-2、Bacillus sp.B-3、Pandoraeasp.B-6、Novosphingobium sp.B-7、Cupriavidus sp.B-8、Comamonas sp.B-9以及一株霉菌Aspergillus sp.F-1。采用染料苯胺蓝和RB亮蓝平板定性检测菌株产木质素降解酶,初筛得到的7株具有木质素降解潜力的菌株均能产木质素降解酶。以木质素磺酸钠为唯一碳源的培养基对菌株进行液体降解培养实验,采用紫外分光光度法,在280nm处测定培养滤出液的吸光度,初步研究了筛选到的7株菌的木质素降解性能。结果表明,6株细菌的木质素降解率在14h内均可以达到20%左右,霉菌培养72h也达到了33.3%,7株菌种均具有高效的木质素降解能力。对细菌Acinetobacter sp.B-2、Pandoraea sp.B-6、Novosphingobium sp.B-7进行了培养条件的调控实验,得到了这三株菌适宜的木质素降解条件。菌株Acinetobacter sp.B-2和Novosphingobium B-7适宜的降解条件为:氮源NH4NO3,氮含量0.01mol/L,pH=7,温度为30℃,摇床转速120r/min;菌株Pandoraea sp.B-6优化后的降解条件为:氮源NH4H2PO4,氮含量0.03mol/L,pH=7,温度为30℃,摇床转速120r/min。在适宜的降解条件下,采用木质素浓度-TC标准曲线法进一步测定了菌株Acinetobacter sp.B-2的木质素降解性能,培养4天该菌对木质素的降解率可达40%。菌株Acinetobacter sp.B-2能够在胞外分泌锰过氧化物酶(MnP)、木质素过氧化物酶(LiP)以及漆酶(Lac)这三种酶,并且具有较高的活性。其中MnP活性峰值出现在第2天,酶活性达到600 U/L;LiP活性峰值也出现在第2天,但只有121.84 U/L;Lac活性峰值则出现在培养的第4天,酶活性高达714.28 U/L。