论文部分内容阅读
目的：本实验主要是通过研究小分子RNA干扰抑制bFGF表达,观察其对肺腺癌A549干细胞标志OCT-4表达和细胞增殖能力、克隆能力、凋亡及侵袭性等肿瘤干细胞特性的影响。方法：预实验挑选出干扰效果最优的质粒后,将顺铂筛选的A549细胞分为转染bFGF质粒PGCsiU6-bFGF-siRNA干扰组(质粒干扰组)、转染阴性对照质粒PGCsiU6-NC-siRNA组(阴性对照组)和未转染质粒组(空白对照组)。对各组细胞采用Real-Time PCR检测观察A549细胞bFGF及OCT-4mRNA表达变化,West-Blot检测bFGF及OCT-4蛋白表达变化。用CCK-8比色法检测细胞增殖能力；克隆形成实验检测克隆能力；Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况；Transwell实验测细胞侵袭能力。结果：与空白对照组相比,阴性对照组及质粒干扰组bFGF-siRNA-1、 bFGF-siRNA-2、bFGF-siRNA3的bFGF mRNA(?)目对表达分别为其(1.028±0.215)倍、(0.209±0.044,P<0.01)倍、(0.609±0.158,P<0.05)倍及(0.908±0.029)倍；OCT-4mRNA相对表达分别为(1.022±0.121)倍、(0.486±0.085,P<0.01)倍、(0.796±0.138,P<0.05)倍及(0.879±0.025)倍,其中bFGF-siRNA-1干扰效果最优,以bFGF-siRNA-1质粒(质粒干扰组)行后续实验。质粒干扰组、阴性对照组和空白对照组A549细胞的OCT-4蛋白相对表达分别为0.440±0.046、0.748±0.102、0.726±0.019；bFGF蛋白相对表达分别为0.384±0.063、0.719±0.217、0.695±0.162,与阴性对照组和空白对照组相比,质粒干扰组的bFGF及OCT-4蛋白表达明显下降(P<0.01)；第2～7天质粒干扰组细胞增殖能力明显弱于阴性对照组和空白对照组(第2～4天各P<0.05,第5～7天各P<0.01)；质粒干扰组细胞克隆形成率(12.25%±2.97%)明显低于空白对照组(44.25%±3.31%,P<0.01)和阴性对照组(42.75%±4.50%,P<0.01)；质粒干扰组凋亡率(26.67%±0.59%)明显高于空白对照组(9.05%±1.20%,P<0.01)和阴性对照组(8.45%±1.18%,P<0.01)；穿过Transwell底膜的细胞数(10.83±1.72)明显低于空白对照组(33.16±2.86, P<0.01)和阴性对照组(32.17±3.19,P<0.01)。结论：靶向siRNA可以抑制A549细胞bFGF的表达,下调干细胞标志物OCT-4表达；降低细胞增殖、克隆形成及侵袭能力,诱导细胞凋亡增加,改善肺癌干细胞的恶性特性。以bFGF基因靶点,用小分子RNA干扰技术抑制bF6F靶基因的表达及其通路的活化,可能成为肺癌治疗并有可能是针对肺癌干细胞治疗有效选择。