叶用莴苣LsSTPK和LsMAPK4基因的克隆与LsSTPK基因在抽薹中的功能分析

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叶用莴苣(Lactuca sativa L.)适宜在凉爽湿润的条件下生长,在夏季时,气温升高容易出现先期抽薹,导致品质下降,这是影响叶用莴苣实现周年生产的一个关键问题。目前,关于调控叶用莴苣高温抽薹分子机制的研究尚少。因此,挖掘与叶用莴苣高温抽薹相关的基因,深入探讨其作用机制对培育耐抽薹品种和解决叶用莴苣周年生产难题有重要意义。本课题组前期在关于叶用莴苣高温抽薹的差异磷酸化蛋白质组研究中筛选到两个差异蛋白,分别为蛋白质丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(STPK)和丝分裂原活化蛋白激酶4(MAPK4),这两个蛋白在高温抽薹组表达量下调。然而,STPK基因在叶莴苣中的作用机制及其与抽薹的关系尚不清楚。本试验以叶用莴苣‘GB30’品种为材料,利用基因克隆、生物信息学分析、qPCR以及病毒诱导的基因沉默等方法,初步探究LsSTPK和LsMAPK4基因在叶用莴苣高温抽薹过程中的作用,为避免叶用莴苣夏季高温抽薹,实现周年生产提供理论依据。结果如下:1.采用RT-PCR技术克隆获得了1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因,将其命名为LsSTPK基因,该基因编码区为1095 bp,共编码365个氨基酸亚细胞定位结果显示LsSTPK被定位于细胞核。2.采用RT-PCR技术克隆获得了1个丝分裂原活化蛋白激酶基因,命名为LsMAPK4基因,该基因全长1641 bp,编码区为1134 bp,共编码378个氨基酸,具有促分裂原活化蛋白激酶的保守结构域,亚细胞定位结果显示LsMAPK4被定位于细胞核。3.实时荧光定量PCR结果表明,LsSTPK基因和LsMAPK4基因在叶用莴苣茎中的表达量显著高于根和叶;转录和翻译水平上,高温处理下该基因在茎中表达量均明显低于对照组,说明该基因的表达受高温影响。4.利用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法将LsSTPK基因沉默后,茎长大于对照组,同时IAA、GA3和ABA含量较对照组升高。处理组植株花芽分化,对照组植株未见花芽分化。以上结果表明,LsSTPK抑制了高温条件下叶用莴苣抽薹。
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