银杏组织培养及其试管苗的雌雄鉴别与调控

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银杏是典型雌雄异株裸子植物,是当今地球上现存种子植物中最为古老的“孑遗植物”之一,在植物界有“活化石”之称,其经济价值表现在食用、药用、材用、保健、观赏、生态防护等方面,在中国被当作“宝树”,是一个重要的多用途特种经济生态型树种。本文以银杏优良品种“佛手”为材料,在离体条件下研究不同种类、不同浓度的激素对胚离体培养、愈伤组织的诱导与分化以及腋芽的萌发与生长的影响;用赤霉素和乙烯利调控试管苗的性别分化,通过同工酶和ATP含量对银杏的雌雄进行早期鉴别,满足市场对雌性或雄性植株的需求,并为银杏的定向育种提供理论依据和实践指导。 实验结果表明:1/4MS和1/2MS培养基上成苗率高,幼苗健壮,成熟胚比未成熟胚易于成苗。2,4-D与BA组合比NAA和KT有利于各种外植体愈伤组织的诱导,未成熟胚子叶出愈率高、诱导速度快;NAA与KT组合更利于愈伤的继代培养,未成熟胚的胚轴在MS+NAA2.0mg/L+KT1.0mg/L的培养基上产生的愈伤颜色为乳白色,质地紧密,进一步继代培养时愈伤组织生长质量好。·MS+TDZ1.5mg/L+NAA0.1mg/L培养基中有不定芽的分化,而在BA与NAA组合的所有培养基中均没有不定芽的分化。银杏腋芽在MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培养基中萌发率最大,达到92.7%,BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L的激素组合有利于腋芽的继代培养。胚乳提取液、水解酪蛋白和活性炭对银杏的组织培养有很大的影响,既可提高不定芽的分化率(提高到5.24%),又能促进胚及腋芽萌发和改善幼苗的生长状况。同时发现POD活性和ATP含量与银杏愈伤组织生长与分化有一定的相关性。银杏雌雄株间SOD同工酶、酯酶同工酶和ATP含量不存在差异,POD同工酶谱带有明显而稳定的差异,可作为银杏试管苗性别鉴定的指标。在离体培养时,试管苗在90d时性别已分化;赤霉素和乙烯利可改变银杏试管苗的雌雄株数的比例,且与激素的浓度有关,当GA3浓度为10mg/L时,雄株的比例最大,为86.67%,乙烯利在浓度为5mg/L时的诱雌率最大,达90%。
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