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烟草青枯病是烟草生产上面临的一种重要的细菌性病害,主要通过土壤、水体及人类活动等方式进行传播,危害范围广,已经对烟草生产造成了极为严重的后果。农业措施、化学防治和生物防治是目前防治烟草青枯病的主要措施,然而这些防治措施都有着各自的局限性,导致防治效果不佳。抗性诱导技术因其安全、无毒、用量极少,且一般引起的防御是广谱性等优点,成为烟草青枯病的防治研究领域中的热点。香豆素类化合物是一类具有多种生物活性的植物源化合物,在医药领域应用广泛,农业上也有所应用。其中瑞香素属于羟基香豆素,具有杀虫、抑菌和调节生长的活性,是一种潜在的植物抗性诱导剂。因此本研究选用瑞香素作为抗性诱导剂,以烟草青枯病为防治对象,首先评价了瑞香素的诱抗活性,筛选出诱导烟草对青枯病的有效浓度及最佳使用的方法;然后探究了瑞香素诱导烟草抗病性的机理;最终通过室内和大田实验进一步验证了瑞香素诱导烟草抗青枯病的防控效果。主要研究结果如下:1瑞香素显著诱导烟草对青枯病的抗性,降低了青枯病的病情指数通过室内盆栽实验测定了瑞香素对烟草的诱抗防病效果,结果表明瑞香素浓度为2.85mg/L、5.70 mg/L和11.40 mg/L的诱导处理防病效果最佳,三种浓度处理的病情指数分别为2.17、2.61、2.47,对烟草青枯病的相对防效分别为44.29%、32.86%和36.43%。为了研究瑞香素对青枯菌侵染烟草的影响,通过平板计数法测定了瑞香素诱抗处理对青枯菌在烟株根部和茎基部含量的影响,结果表明瑞香素2.85 mg/L浓度处理的烟株在接种青枯菌10 d后根部菌含量为7.94×10~5 CFU/g,显著低于对照1.70×10~8 CFU/g;瑞香素处理可以阻止青枯菌从根部向茎基部的传导,2.85 mg/L浓度处理的烟株在接种青枯菌10 d后的茎基部菌含量为1.07×10~5 CFU/g,显著低于对照2.34×10~6 CFU/g。为了研究瑞香素诱抗的最佳施用方法,通过室内盆栽实验研究了施用方式、间隔期和施用次数对烟草青枯病发生的影响,结果表明瑞香素的最佳施用方法为叶面喷施,最佳施用间隔期为3~5 d,最佳诱导次数为2次。2瑞香素处理诱导烟草防御酶活性的提升,促进烟株根部木质素含量的增加为了研究瑞香素处理对烟草防御酶的影响,测定了瑞香素处理后烟草防御酶酶活的变化,结果表明,瑞香素处理可以诱导POD、SOD、PAL、PPO酶活的升高。其中,POD酶活在处理12 h达到最大值,此时瑞香素处理的酶活约为对照的3.56倍;SOD酶活在处理10 min达到最大值,此时瑞香素处理的酶活约为对照的1.88倍;PAL的酶活在处理1 h达到最大值,此时瑞香素处理的酶活约为对照的1.51倍;PPO的酶活在处理12 h后达到最大值,此时瑞香素处理的酶活约为对照的1.82倍。为了测定瑞香素对烟株根部木质化的影响,测定瑞香素处理以后烟株根部木质素含量的变化,结果表明瑞香素能够促进烟株根部木质素含量的升高,提高烟株的防御能力。其中,处理4 d后,瑞香素的木质素含量提高了1.33倍;处理5 d后,瑞香素的木质素含量提高了1.39倍;处理6 d后,瑞香素的木质素含量提高了1.44倍;处理7 d后,瑞香素的木质素含量提高了1.54倍。3瑞香素主要通过烟草茉莉酸途径激活烟草抗病性通过高效液相色谱,检测了瑞香素处理后烟草叶片的植物激素含量的变化。结果显示,瑞香素处理后烟草叶片中水杨酸含量下降,在10 min、6 h时均显著低于对照,分别降低了1.33倍、1.34倍。瑞香素处理后可以迅速提升烟草叶片中茉莉酸含量,在10 min、6 h时均显著高于对照,分别提高了1.56倍、1.36倍。瑞香素处理后可以提高烟草叶片中脱落酸的含量,在6 h时显著高于对照,提高了1.34倍。通过实时定量PCR检测了瑞香素对烟草抗性基因的表达情况,结果显示,瑞香素处理6h、12 h和24 h时,PR1基因的表达显著高于对照,分别提高了14.60倍、20.34倍和27.53倍;瑞香素处理在6 h和12 h时,NPR1基因的表达显著低于对照,分别抑制了2.23倍、3.65倍;瑞香素处理在10 min、6 h时,JAZ3基因的表达显著低于对照,分别抑制了31.59倍、9.19倍。植物激素含量测定与抗性基因表达的研究结果证明了瑞香素诱导抗性主要是通过茉莉酸途径去触发防御,提高了植物的抗病性。4瑞香素对室内及田间烟草青枯病具有较好的控病效果通过室内盆栽实验和大田实验,进一步验证了瑞香素对烟草青枯病的防治效果。结果表明,在室内盆栽条件下,瑞香素对烟草青枯病具有一定的防控效果,在接种16 d时,瑞香素浓度为2.85 mg/L和11.40 mg/L处理的防治效果分别为54.20%、46.56%,显著高于其它处理,瑞香素浓度为0.714 mg/L处理防治效果为15.27%,低于BTH处理的25.95%。大田实验中,瑞香素2.85 m/L浓度处理在发病高峰期(7月30日)的相对防效为69.93%,显著高于其它处理防效,而0.71 mg/L、11.40 mg/L浓度处理的相对防效分别为43.65%、57.06%,与对照药剂INA和BTH处理的相对防效57.63%和32.77%相当。