论文部分内容阅读
目的:神经胶质细胞瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤。实践证明:化疗是继胶质瘤手术切除之后的诸多治疗环节中至关重要的一环。但“化疗耐药”是继“透过血脑屏障”之外胶质瘤化疗的又一大难题。肿瘤临床治疗失败最主要的原因之一就是发生肿瘤细胞的多药耐药(Multidrugrisistance,MDR)。研究发现MDR的一个最主要的原因就是在肿瘤细胞中过度表达P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)。与多药耐药相关的P-gp是由多药耐药基因-1(Mu1tidrugresistancegene1,mdr1)编码。
热休克因子(heatshockfactor,Hsf)是一组结构和功能具有广泛同源性,普遍存在于真核生物细胞中的蛋白质,调控热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)家族基因的表达。Hsf1对应激条件敏感,可在应激条件下由单体结合成三聚体,与热休克基因上游的热休克元件(Heatshockelement,HSE)结合,促进HSP基因的高效转录。
最近研究发现Hsf1不仅能够调节热休克蛋白的表达,而且与P-gp表达调控有关。研究发现mdr1基因启动子中包含数个HSE,热休克或亚砷酸钠可以激活Hsf1,增加mdr1表达水平。本实验旨在观察抗肿瘤药物阿霉素(adriamycin,ADM)化疗后C6细胞中Hsf1和P-gp的表达变化。
方法:1.将ADM溶于培养液中,浓度为2ug/ml。将C6细胞在含有ADM的培养液中培养4h。
2.采用Westernblot检测化疗前、化疗后2h、4h、8h、12h、24h时Hsf1和P-gp的表达;以及化疗前1h分别应用浓度为10umol/L、100umol/L、500umol/L、1000umol/L槲皮素预处理后在化疗后8h时两者的表达。
3.图像处理:应用电泳凝胶成像分析仪扫描硝酸纤维素膜,测定各组蛋白质带的IDV值,作为Hsf1和P-gp的相对含量。
4.统计分析:所用实验数据均用均数±标准差((x)±s)表示,各组数据间差异性比较使用t检验,以SPSS11.0统计软件完成。
结果:1.阿霉素化疗后C6细胞中Hsf1的表达变化阿霉素化疗后C6细胞中Hsf1的三聚体含量于2h组中显著增加,4h组中达到高峰,为对照组的2.81倍,随后于8h,12h,24h组中表达含量逐渐下降,各实验组中的Hsf1三聚体含量与对照组比较差异显著(P<0.05)。
2.阿霉素化疗后C6细胞中P-gp的表达变化
阿霉素化疗后C6细胞中P-gp的表达含量于2h组中开始逐渐增加,8h组中达到高峰,为对照组的1.97倍,随后于12h,24h组中表达含量逐渐下降,各实验组中的P-gp含量与对照组比较差异显著(P<0.05)。
3.槲皮素预处理+化疗后8hC6细胞中Hsf1的表达变化
不同浓度槲皮素预处理+化疗后8h时C6细胞中Hsf1三聚体含量随Qu浓度的增加而下降;10umol/L组中Hsf1三聚体含量与对照组比较元显著性差异(P>0.05),100umol/L,500umol/L,1000umol/L组中Hsf1三聚体含量与对照组(化疗后8h)比较差异显著(P<0.05);1000umol/L组中抑制Hsf1三聚体含量的效果最明显。
4.槲皮素预处理+化疗后8hC6细胞中P-gp的表达变化不同浓度槲皮素预处理+化疗后8h时C6细胞中P-gp含量变化趋势与Hsf1三聚体含量的变化相似;10umol/L组中P-gp含量与对照组比较无明显差异(P>0.05),100umol/L,500umol/L,1000umol/L组中P-gp含量与对照组比较差异显著(P<0.05);1000umol/L组中抑制P-gp含量的效果最明显。
结论:ADM化疗可激活HSF1的活性,增加P-gp的表达。Qu可抑制HSF1的激活,并呈现量效反应关系。抑制HSF1后P-gp的表达下降。