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本文主要从以下几个部分展开论述: 第一部分 斑马鱼肿瘤坏死因子弱诱导凋亡因子TWEAK(简称zTWEAK)基因的克隆、表达、组织分布以及生物信息学分析。 TWEAK是肿瘤坏死因子配体超家族成员,是一个多功能的细胞因子。为研究不同物种之间此基因进化关系,本文运用反转录PCR的方法克隆了斑马鱼的TWEAK的cDNA,其中开放阅读框由711个碱基对组成,编码236个氨基酸。通过比对斑马鱼的TWEAK基因序列,显示zTWEAK基因与hTWEAK(人 TWEAK)基因序列的同源性是31.4%,与鼠TWEAK序列的同源性是30.8%,进化树分析还表明斑马鱼与河鲀鱼的同源性是48.0%,而与绿河鲀的同源性是59.5%,与哺乳动物的同源性从29.6%到32%之间。克隆zTWEAK基因,并将其与SUMO基因融合后于大肠杆菌BL21中表达,融合蛋白大小是33KD,通过Ni-NTA纯化,并经SDS-PAGE和western检测,成功表达并纯化融合蛋白,为斑马鱼作为模式动物提供了有用的信息。 第二部分 暗纹东方鲍TRAIL基因的克隆、表达、组织分布及生物学功能的研究。 用反转录PCR方法克隆暗纹东方纯的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(简称gTRAIL)的全长cDNA,其开放阅读框包含870碱基对,编码的蛋白质序列与其他的鱼类具有高度的同源性。将TRAIL与SUMO基因融合表达是为增强其在大肠杆菌BL21中的可溶性,体外MTT检测表明TRAIL融合蛋白剂量依赖性的诱导Jurkat和Hela细胞的凋亡。