一株鲈鲤源SVCV的分离鉴定及其对I-IFNs信号通路影响的研究

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鲤春病毒血症(Spring Viremia of Carp,SVC)是一种主要危害鲤科鱼类的急性、出血性传染病,中国农业部将其列为一类动物疫病。2016年,四川乐山某养殖场鲈鲤流行一种以全身多器官出血为临床特征的传染病,累计死亡率达40%以上,造成严重的损失。为明确病因,本研究从自然发病鲈鲤体内分离病原,并进行组织病理学观察,人工感染试验和半巢式RT-PCR检测,确定其病原为鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV),基于SVCV糖蛋白基因进行系统发育分析确定其为Ia型。随后,对该株鲈鲤源SVCV的病毒形态、病毒滴度、有机溶剂敏感性、胰蛋白酶敏感性、酸碱敏感性、热敏感性、冻融次数对病毒滴度的影响、病毒的最适培养温度、最适培养细胞系和病毒的繁殖动态等理化特性与生物学特性进行测定。结果显示其呈典型的子弹状,对有机溶剂、胰蛋白酶、过酸和过碱敏感,60℃作用30min可被灭活,但反复冻融对其毒力影响不大;最适培养温度范围为16℃左右,最适培养细胞系为EPC和FHM,且在EPC细胞系中培养7d后病毒滴度(TCID50)为107.24/0.1ml,病毒在24h开始进入对数生长期,至96h时病毒滴度到达峰值并趋于稳定。干扰素在机体抵抗病毒感染的过程中有着十分重要的作用,为了解SVCV感染后对宿主干扰素信号通路相关因子表达的影响,本研究以EPC细胞为模型进行SVCV感染的体外实验,检测SVCV感染后不同时间点细胞中Toll样受体及干扰素通路相关因子(干扰素调节因子(IRFs)、干扰素(IFNs)和干扰素刺激基因(ISGs))的表达变化以及不同时间点病毒载量的变化。结果显示EPC细胞在感染SVCV后,病毒在6h就开始复制增殖,96h病毒载量最高;在感染早期,TLR3和TLR4转录水平迅速上升,最高时分别为对照组的2.54倍和79.67倍;随后启动免疫应答反应,刺激IRF3和IRF7的表达,进而诱导I-IFNs的表达,其中发挥主要作用的是IFNa1,其表达量最高时为对照组的2810.60倍;在病毒感染后期,I-IFNs刺激其下游ISGs的大量表达而发挥抗病毒免疫应答效应,其中ISG15和Vig-1的上调幅度最大,最高时为对照组的1889.96倍和865.54倍。说明这些干扰素相关免疫相关因子均参与了抗SVCV的过程。
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