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欧亚旋覆花(Inula britannica L.)是一种传统植物药,倍半萜内酯类和酚酸类成分是欧亚旋覆花中的主要活性成分,但由于种类多样且含量较低,使其深入研究受到限制。液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)具有专属、快速、灵敏等优点,是复杂样品中化学成分鉴定和定量分析的有力工具。本研究即采用LC-MS技术对欧亚旋覆花中的6种倍半萜内酯类成分和9种酚酸类成分共15种成分进行分析。在总结倍半萜内酯类和酚酸类成分化合物电喷雾质谱裂解规律的基础上,建立欧亚旋覆花中的15种成分的二级质谱库;建立欧亚旋覆花中15种成分鉴定及定量的LC-MS分析方法,并用于不同产地的欧亚旋覆花药材的比较和大鼠灌胃给予欧亚旋覆花提取物后该15种成分的药代动力学研究。 第一部分、欧亚旋覆花中15种成分的液质联用法鉴定及定量分析研究 目的:建立一种快速、准确、可同时鉴定及定量欧亚旋覆花中15种化学成分(6种倍半萜内酯类成分和9种酚酸类成分)的HPLC-ESI-MS分析方法,并用于欧亚旋覆花药材分析。 方法:建立15种化学成分的标准二级质谱库,由MRM-IDA-EPI模式对15种化合物结构进行确证,采用MRM正负离子扫描模式建立其含量测定方法,并采用所建立的方法对不同产地的15批欧亚旋覆花药材进行分析。质谱条件:ESI源;正负离子分别监测,6种倍半萜内酯类成分采用正离子模式,9种酚酸类成分采用负离子模式。色谱柱:Sepax GP-C18柱,3μm,100×2.1 mm;柱温:25℃。流动相:乙腈-水(1‰甲酸)梯度洗脱;流速:300μL/min;进样量:5μL。 结果:15种化学成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,精密度、准确度、检测限和定量限均符合要求。样品测定结果表明,欧亚旋覆花产地是影响15种成分含量的较为重要的因素之一。同时发现,这15种成分主要存在于其花中,茎及地上部分相对较低。 结论:本法简便、快速、专属性好,首次建立并应用LC-MS方法鉴定及定量分析欧亚旋覆花中15种化学成分。该法对于欧亚旋覆花药材的质量控制具有重要意义。 第二部分、液质联用法测定口服给予欧亚旋覆花提取物后的大鼠血浆中的15种欧亚旋覆花化学成分及其药代动力学研究 目的:建立测定大鼠血浆中15种欧亚旋覆花化学成分含量的LC-MS方法,并用于大鼠灌胃给予欧亚旋覆花提取物后该15种成分的药代动力学研究。 方法:大鼠灌胃给予欧亚旋覆花提取物(0.5、1.0、1.5 g/kg)后,分别于给药后0.083、0.17、0.33、0.5、1、2、4、6、8和12h,眼内眦静脉丛取血,制备血浆样品,采用液-液萃取方法进行样品预处理,磺胺甲噁唑为内标。色谱柱为C18柱,流动相为乙腈-水(1‰甲酸)梯度洗脱。采用电喷雾离子源(ESI),正负离子模式扫描,多反应监测(MRM)模式进行检测。 结果:专属性和基质效应考察表明此方法专属且没有显著的基质效应。该法各化合物的线性关系良好,其相关系数≥0.99。日内和日间检测精密度均小于13.6%,日内和日间检测准确度均小于11.4%。在稳定性试验研究中,旋覆花内酯和旋覆花黄酮在大鼠血浆内的稳定性的相对误差(RE)值均小于11.3%。化合物2-6在不同剂量组仅有几个时间点能够检测到,其余化合物1及化合物7-15在各剂量组大鼠各时间点的血药浓度绘制血药浓度-时间(c-t)曲线。以非房室模型计算大鼠给药后的药物动力学参数。化合物1、7-15的Tmax均在0.4 h左右,且Cmax、AUCo-t和AUCo-∞均随给药剂量的增加呈线性增加。 结论:该法灵敏度高、选择性好、精密度好,可用于大鼠灌胃给予欧亚旋覆花提取物后,血浆中欧亚旋覆花成分的药代动力学研究,该结果可为欧亚旋覆花临床用药提供参考。