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背景和目的:肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,也是全球第三大癌症死亡原因。早期肝癌的患者在经过根治性切除治疗后,其5年生存率可以达到70%以上。然而大部分患者在诊断为肝癌时已经处在了中晚期,此时的肝癌已经发生了转移,这是导致治疗不理想和癌症死亡的主要原因。因此深入了解肝癌转移潜在的分子机制十分重要。EMT是上皮细胞失去其细胞特性并获得间充质表型从而获得侵袭性能力的过程,已经有许多研究证实EMT在促进肝癌的转移中扮演着关键角色,因此深入研究EMT上游的调控机制对于肝癌转移的干预十分关键。NCAPG是一种和减数分裂和有丝分裂相关的蛋白,许多研究都证实NCAPG在肿瘤的进展过程中发挥着不可忽视的作用。然而,NCAPG在肝癌EMT当中所起到的作用目前还尚不清楚。本研究的主要目的是探讨NCAPG调控肝癌EMT的具体机制。方法:1、通过TCGA、GEO、CPTAC等公共数据库分析NCAPG在肝癌和癌旁组织中的表达情况以及NCAPG的表达和患者预后的关系;通过Western Blot、q RT-PCR、免疫组化实验分析我院收集的肝癌和癌旁组织标本中NCAPG的表达情况,并通过生存分析探究NCAPG的表达水平和患者预后的关系。2、通过Western Blot及免疫荧光实验分析改变NCAPG的表达后肝癌细胞EMT相关蛋白的表达情况;通过Transwell、划痕以及体内实验分析改变NCAPG的表达以后对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响;通过Western Blot及免疫荧光实验分析过表达或敲低NCAPG的同时敲低或过表达β-catenin后,肝癌细胞EMT相关蛋白的表达情况;通过Transwell、划痕以及体内实验分析过表达或敲低NCAPG的同时敲低或过表达β-catenin后,肝癌细胞侵袭迁移能力的变化。3、通过q RT-PCR分析改变NCAPG的表达后β-catenin的表达情况;通过Western Blot实验分析,在肝癌细胞中加入MG132后β-catenin随时间变化的表达情况,在肝癌细胞中改变NCAPG的表达后加入MG132,β-catenin的表达情况。通过Western Blot实验分析在肝癌细胞中改变NCAPG的表达后加入CHX,β-catenin的降解速率的变化情况;通过CO-IP实验分析在在肝癌细胞中改变NCAPG的表达后加入MG132,β-catenin泛素化水平的变化情况。4、通过CO-IP实验分析肝癌细胞中NCAPG和β-catenin之间的结合情况;CO-IP质谱分析肝癌细胞中与NCAPG可能结合的蛋白;通过CO-IP实验分析肝癌细胞中NCAPG和SIP的结合情况;通过CO-IP实验分析在肝癌细胞中改变NCAPG的表达后,SIP和Siah1、Skp1的结合情况。结果:1、通过TCGA、GEO、CPTAC等公共数据库分析得出NCAPG在肝癌组织中高表达且与患者的不良预后密切相关;通过Western Blot、q RT-PCR、免疫组化实验分析我院收集的肝癌和癌旁组织标本后得出NCAPG在肝癌组织中高表达,生存分析结果得出高表达NCAPG提示患者预后差。2、通过Western Blot及免疫荧光实验分析得出在肝癌细胞中过表达NCAPG后能够促进EMT相关蛋白的表达,而敲低NCAPG后能够抑制EMT相关蛋白的表达;通过Transewell、划痕以及体内实验分析得出过表达NCAPG后肝癌细胞的侵袭迁移能力增强,而敲低NCAPG后肝癌细胞的侵袭迁移能力减弱;通过Western Blot及免疫荧光实验发现在肝癌细胞中过表达NCAPG后,EMT相关蛋白表达增强,但当过表达NCAPG的同时敲低β-catenin后,EMT相关蛋白表达的表达明显被回复,在肝癌细胞中敲低NCAPG后,EMT相关蛋白表达减弱,但当敲低NCAPG的同时过表达β-catenin后,EMT相关蛋白表达的表达明显被回复;通过划痕实验和Transwell实验发现在肝癌细胞中过表达NCAPG后侵袭迁移能力明显增强,但过表达NCAPG的同时敲低β-catenin后可以回复过表达NCAPG所导致的侵袭迁移能力增强,在肝癌细胞中敲低NCAPG后侵袭迁移能力明显减弱,但敲低NCAPG的同时过表达β-catenin后可以回复敲低NCAPG所导致的侵袭迁移能力减弱。3、通过q RT-PCR实验发现在肝癌细胞中改变NCAPG的表达后,β-catenin的m RNA表达水平并未发生明显改变;通过Western Blot实验发现在肝癌细胞中加入MG132后,β-catenin的表达随着MG132作用时间的延长而增强,在肝癌细胞中改变NCAPG的表达后加入MG132,β-catenin的表达并不随着NCAPG的改变而发生变化;Western Blot实验分析发现在肝癌细胞中过表达NCAPG后加入CHX,β-catenin的降解速率减慢,而在肝癌细胞中敲低NCAPG后加入CHX,β-catenin的降解速率加快;CO-IP实验分析发现在肝癌细胞中过表达NCAPG后加入MG132,β-catenin的泛素化减弱,而在肝癌细胞中敲低NCAPG后加入MG132,β-catenin的泛素化增强。4、通过CO-IP实验分析发现NCAPG并不与β-catenin发生结合;通过IP质谱分析得出NCAPG可能与SIP发生结合,并且通过COIP实验证实了这一结果;通过CO-IP实验分析发现在肝癌细胞中过表达NCAPG后,SIP和Siah1、Skp1的结合均减少,而在肝癌细胞中敲低NCAPG后,SIP和和Siah1、Skp1的结合均增多。结论:本研究结果证实了NCAPG在肝癌组织中高表达且与不良预后密切相关,并且还阐明了NCAPG通过竞争性结合SIP抑制β-catenin的泛素化,进而促进肝癌细胞EMT的机制。