【摘 要】
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近年来,我国水产养殖业迅猛发展,随着高密度养殖模式日益扩大,对养殖水体的污染也在逐渐加剧。氨态氮、亚硝态氮和硫化氢等是引起养殖水体恶化的主要污染物,不但会对水生动物产生毒害作用,也会引起水体的富营养化,导致严重的环境问题。生物法脱氮处理养殖水体是目前最高效的方法之一,反硝化细菌在生物法脱氮过程中起着不可替代的作用。本研究从养殖池塘底泥中筛选得到一株安全且具有高效脱氮除硫能力的好氧反硝化细菌,并对其
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近年来,我国水产养殖业迅猛发展,随着高密度养殖模式日益扩大,对养殖水体的污染也在逐渐加剧。氨态氮、亚硝态氮和硫化氢等是引起养殖水体恶化的主要污染物,不但会对水生动物产生毒害作用,也会引起水体的富营养化,导致严重的环境问题。生物法脱氮处理养殖水体是目前最高效的方法之一,反硝化细菌在生物法脱氮过程中起着不可替代的作用。本研究从养殖池塘底泥中筛选得到一株安全且具有高效脱氮除硫能力的好氧反硝化细菌,并对其进行分类鉴定,研究其反硝化特性,最后用其处理模拟养殖水体,研究其除氮效果,为其应用于净化养殖水体提供备选菌株。采用富集培养和溴百里酚蓝平板法从养殖池塘底泥中筛选得到两株反硝化细菌SC16和SC17,通过形态观察和16S r DNA基因序列分析,初步鉴定两株细菌均为芽孢杆菌(Bacillus sp.)。筛选得到的两株细菌均为革兰氏阳性短杆菌,通过硝酸盐还原产气试验,两株细菌均具有良好的产气能力,可用作生物法脱氮的菌种。溶血性试验和毒力试验结果表明,芽孢杆菌SC16是一株无致病性的安全微生物。脱氮除硫特性研究结果表明,在好氧条件下培养72 h,对初始浓度为306.9 mg/L的硝态氮的最终去除率达到97%;以相同试验条件下培养48 h,对初始浓度为165.49 mg/L的氨态氮的最终去除率达到36.6%,对初始浓度为200 mg/L的亚硝态氮的最终去除率达到99.9%,对初始浓度为70.9 mg/L的硫化物的最终去除率达到99.86%;芽孢杆菌SC16在250 mg/L的亚硝酸钠浓度下仍能生长,说明芽孢杆菌SC16对亚硝酸钠的耐受性很强。将芽孢杆菌SC16应用于氨态氮初始浓度为8.35 mg/L,硝态氮初始浓度为0.46 mg/L,亚硝态氮浓度为0.45 mg/L的模拟养殖水体,水体中的菌株SC16终浓度为3.0×10~7Cfu/m L,在好氧条件下培养11天,对氨态氮的最终去除率为47.6%,对硝态氮的最终去除率为23.9%,亚硝态态氮最终去除率为82.2%,其浓度(0.08 mg/L)已降到安全浓度(0.1 mg/L)以下。反硝化特性研究结果表明,碳源、C/N、温度、pH值均可影响芽孢杆菌SC16的脱氮效果,当以柠檬酸为碳源、碳氮比为8、pH值为7.0、温度为28°C时,细菌生长量最高达到OD600值为0.33,24 h的硝态氮去除率达到99.9%。通过Genome Walking克隆获得芽孢杆菌SC16的亚硝酸盐还原酶(nirK)的编码区序列,该编码区基因的ORF框全长876 bp,编码291个氨基酸。在芽孢杆菌SC16去除硝态氨、氨态氮和亚硝态氮的过程中,nirK基因的m RNA表达量水平均出现了上调,而且nirK基因表达量水平的变化模式与去除三种氮源的变化模式相一致,这说明nirK基因与降解氨氮、硝态氮和亚硝态氮密切相关。
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