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第一部分周围型肺癌CT表现、病理与Ki-67、p53关系研究1、目的研究周围型肺癌CT表现、病理与其肿瘤Ki-67抗原、p53表达的相关性。2、材料和方法(1)收集2008年1月至2009年8月,在我院经手术病理证实的周围型肺癌患者53例,其中男35例,女18例,年龄为33～81岁,平均为(59±13)岁。腺癌34例(低分化3例,中～低分化1例,中分化19例,中～高分化2例,高分化9例),鳞癌12例(低分化6例,中～低分化1例,中分化3例,中～高分化1例,高分化1例),腺鳞癌3例(中～低分化2例,中分化1例),小细胞癌3例(低分化3例),大细胞癌1例(低分化1例)。主要临床表现:咳嗽、咯血、气促、胸痛、胸闷、发热、消瘦等。(2)使用德国西门子公司Somatom Sensation 16层螺旋CT机。受检者取仰卧位,头足方向,行全肺平扫,扫描范围从肺尖至膈上水平。从开始注射造影剂后第28秒行全肺增强扫描。选用非离子型造影剂优维显(300mg/ml),采用高压注射器单相团注,注射速率为3.6ml/s;造影剂用量按1.5ml/kg计算。(3)肺癌病灶强化增加的CT值测量:强化增加的CT值为增强的CT值减去平扫的CT值。平扫及强化层面的测量范围尽量保持一致。测量的感兴趣区(ROI)选择病变中心层面,测量范围占病灶短径的70%以上,测量时尽量避开钙化及容积效应的影响。以3个层面CT值的平均值作为病灶该时相的CT值。(4)免疫组化测定方法及结果判定:检测试剂:采用Dako公司提供的第一抗体Ki-67克隆号:MIB-1、p53克隆号:DO-7,第二抗体即用型快捷免疫组化EnVision检测试剂盒,DAB显色液,柠檬酸缓冲液及自制PBS液。检测步骤:Ki-67及p53检测均采用EnVision二步法,详细步骤严格按照说明书进行。结果判定:Ki-67、p53阳性表达在胞核,呈现棕黄色颗粒,每张片随机观察10个高倍视野,计算阳性细胞数。Ki-67抗原用阳性细胞百分率表示。p53阳性强度的判断标准是:<10%为“-”,10%～50%为“+”,>50%为“++”。3、结果鳞癌的Ki-67抗原阳性百分率高于腺癌,34例腺癌Ki-67抗原阳性百分率为(17.71±16.72)%,12例鳞癌Ki-67抗原阳性百分率为(38.88±25.84)%。腺癌、鳞癌的p53表达强度差异无统计学意义。肺癌的分化程度与Ki-67抗原阳性百分率及p53表达强度之间有负相关关系,相关系数分别为r=-0.599和r=-0.507。有深分叶征、毛刺征、棘状突起、瘤体直径≥3.0cm、增强CT值≥20Hu或肺门、纵隔淋巴结肿大的肺癌,其Ki-67抗原阳性百分率、p53表达强度较高。有空泡征或毛玻璃征的肺癌,其Ki-67抗原阳性百分率较低,其p53表达强度差异无统计学意义。有胸膜凹陷征、支气管气相、空洞或钙化的肺癌,其Ki-67抗原阳性百分率及p53表达强度差异无统计学意义。p53阳性的肺癌,其Ki-67抗原阳性百分率高于阴性者。23例p53阴性者,其Ki-67抗原阳性百分率为(19.41±19.61)%,30例p53阳性者,其Ki-67抗原阳性百分率为(32.90±24.09)%。4、结论周围型肺癌CT征象中的深分叶征、瘤体直径≥3.0cm、毛刺征、棘状突起、增强值≥20Hu、空泡征、毛玻璃征或肺门、纵隔淋巴结肿大可以一定程度反映肿瘤Ki-67抗原、p53表达强度。肺癌CT表现与肿瘤Ki-67抗原、p53表达相结合,对评价肿瘤增殖活性有一定的临床价值。第二部分周围型肺癌CT表现、病理与血清肿瘤标志物关系研究1、目的研究周围型肺癌CT表现、病理与血清肿瘤标志物浓度的相关性。2、方法(1)收集2008年1月至2009年8月,在我院经手术病理证实的周围型肺癌患者48例,其中男32例,女16例,年龄为33～81岁,平均为(56±12)岁。腺癌30例(低分化2例,中～低分化1例,中分化16例,中～高分化2例,高分化9例),鳞癌11例(低分化5例,中～低分化1例,中分化3例,中～高分化1例,高分化1例),腺鳞癌3例(中～低分化2例,中分化1例),小细胞癌3例(低分化3例),大细胞癌1例(低分化1例)。主要临床表现:咳嗽、咯血、气促、胸痛、胸闷、发热、消瘦等。(2)使用德国西门子公司Somatom Sensation 16层螺旋CT机。受检者取仰卧位,头足方向,行全肺平扫,扫描范围从肺尖至膈上水平。从开始注射造影剂后第28秒行全肺增强扫描。选用非离子型造影剂优维显(300mg/ml),采用高压注射器单相团注,注射速率为3.6ml/s;造影剂用量按1.5ml/kg计算。(3)肺癌病灶强化增加的CT值测量:强化增加的CT值为增强的CT值减去平扫的CT值。平扫及强化层面的测量范围尽量保持一致。测量的感兴趣区(ROI)选择病变中心层面,测量范围占病灶短径的70%以上,测量时尽量避开钙化及容积效应的影响。以3个层面CT值的平均值作为病灶该时相的CT值。(4)血清肿瘤标志物测定方法:检测试剂:CEA、CYFRA21-1、SCC-Ag、NSE为罗氏公司产品。碘[125I]糖类抗原50免疫放射分析药盒为天津市协和医药科技有限公司产品。检测步骤: CEA、SCC-Ag的检测采用美国雅培I-2000全自动免疫发光分析仪,以微粒子化学发光(ECLIA)技术检查。CYFRA21-1、NSE的检测采用德国罗氏Cobas e411电化学发光仪,以电化学发光(ECLIA)原理进行检测。CA50按照试剂盒要求步骤进行放射免疫(RIA)检测。结果判定:参考值:CEA 0~10 ng/ml,CYFRA21-1 0~3.6 ng/ml,SCC-Ag 0~1.5 ng/ml,NSE 0~15 ng/ml,CA50 0~25 U/ml。3、结果腺癌的血清CEA浓度高于鳞癌,鳞癌的血清CYFRA21-1、SCC-Ag高于腺癌。30例腺癌血清CEA、CYFRA21-1、SCC-Ag浓度分别为(13.23±20.47)ng/ml、(5.26±4.14)ng/ml、(1.04±0.75)ng/ml,11例鳞癌的血清CEA、CYFRA21-1、SCC-Ag浓度分别为(3.62±2.48)ng/ml、(8.70±3.27)ng/ml、(5.57±5.39)ng/ml。肺癌的分化程度与血清肿瘤标志物CEA、CYFRA21-1、SCC-Ag、NSE、CA50等浓度之间差异无统计学意义。有深分叶征的肺癌,其血清CEA、NSE浓度较高。瘤体直径≥3cm的肺癌,其血清CEA、CYFRA21-1、NSE浓度较高。有空洞的肺癌,其血清CYFRA21-1浓度较高。有空泡征或毛玻璃征的肺癌,其血清SCC-Ag浓度较低。有胸膜凹陷征、毛刺征、棘状突起、支气管气相、增强值≥20Hu、钙化或肺门、纵隔淋巴结肿大的肺癌,其血清肿瘤标志物浓度差异无统计学意义。肺癌的Ki-67抗原阳性百分率与血清CEA浓度之间有正相关关系,相关系数r=0.576。p53阳性的肺癌,其血清CEA浓度高于阴性者。22例p53阴性的肺癌,其血清CEA浓度为(3.64±2.11)ng/ml,26例p53阳性的肺癌,其血清CEA浓度为(19.37±24.40)ng/ml。4、结论(1)有深分叶征的周围型肺癌,血清CEA、NSE浓度较高;瘤体直径≥3cm的肺癌,血清CEA、CYFRA21-1、NSE浓度较高;有空洞的肺癌,血清CYFRA21-1浓度较高;有空泡征或毛玻璃征的肺癌,血清SCC-Ag浓度较低。周围型肺癌CT表现与血清CA50浓度关系不大。(2)周围型肺癌血清CEA浓度与肿瘤Ki-67抗原有正相关性。p53表达阳性的周围型肺癌,其血清CEA浓度较高。