高良姜挥发油抗肺癌作用的初步研究

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目的:  1.提取分离高良姜挥发油及鉴定其成分。  2.评价高良姜挥发油抗肺癌活性。  3.初步探讨高良姜挥发油抗肺癌分子机制。  方法:  1.采用水蒸气蒸馏法提取分离高良姜挥发油,应用气相色谱-质谱联用技术对其成分进行定性分析。  2.用MTT方法和细胞克隆形成实验检测高良姜挥发油对人肺癌细胞增殖的影响。  3.采用癌细胞培养移植法建立裸鼠人肺癌A549细胞移植瘤模型,评价高良姜挥发油体内抑瘤效果。  4.HE染色观察实验动物器官组织的病理形态学变化。  5.利用荧光倒置显微镜观察Hoechst33342染色后细胞凋亡形态学变化。  6.利用流式细胞仪,PI染色检测细胞周期变化、Annexin-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率、JC-1探针标记检测线粒体膜电位变化和FITC标记检测PCNA蛋白表达水平。  7.蛋白印迹法检测Bcl-2和Mcl-1蛋白的表达。  8.免疫组化检测瘤组织中蛋白PCNA、Mcl-1和Bax的表达。  结果:  1.高良姜挥发油呈淡黄色、均匀透亮的油状液体,且具明显的芳香气味,提取率约为1.2%。经GC-MS检测分析其主要成分为桉叶油醇、α-松油醇、β-蒎烯、莰烯和α-蒎烯。  2.高良姜挥发油呈浓度依赖性地抑制五种人肺癌细胞的增殖和A549细胞克隆的形成。  3.高良姜挥发油治疗组体重变化率与对生理盐水组、溶剂组比较均无显著性差异(P>0.05),与顺铂组比较有显著性差异(P<0.001);预防组和高剂量、顺铂组肿瘤体积倍增时间延长,与生理盐水组、溶剂组比较均有显著性差异(P<0.01);高良姜挥发油治疗组和顺铂组的瘤体积和瘤重均小于生理盐水组、溶剂组,具有显著性差异(P<0.01);顺铂组的抑瘤率为58.2%,高良姜挥发油预防组、低剂量组和高剂量组的抑瘤率分别48.7%、35.0%和53.6%。  4.HE染色结果显示,高良姜挥发油治疗组的癌细胞多数核固缩,胞浆空泡化,坏死区域呈剂量相关性增多;生理盐水组和溶剂组裸鼠腋下淋巴结均可见有癌细胞转移、转移率为25%,顺铂组和高良姜挥发油治疗组腋下淋巴结均未见有癌细胞转移;各实验组裸鼠的肝和肺均无明显组织病理学差异。  5.高良姜挥发油处理组呈浓度依赖性诱导A549细胞凋亡,阻滞A549细胞于G1期,降低线粒体膜电位,下调PCNA、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达水平。  6.免疫组化检测显示,高良姜挥发油治疗组呈剂量依赖性地下调移植瘤组织PCNA和Mcl-1的表达,而呈剂量依赖性地上调移植瘤组织Bax的表达。  结论:  1.采用水蒸气蒸馏法能稳定提取分离高良姜挥发油。  2.高良姜挥发油能抑制人肺癌细胞增殖。  3.高良姜挥发油可通过影响蛋白PCNA、Bcl-2、Mcl-1和Bax的表达水平,抑制A549细胞增殖和诱导其凋亡。
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