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目的:摸清浙产人工种植三叶青的多糖、黄酮类物质(包括总黄酮和槲皮素)含量及其差异性变化规律和三叶青醇提取物不同黄酮洗脱组分的抗氧化活性,并探明其抗氧化能力与黄酮含量的相关性,为浙产人工种植三叶青代替野生三叶青用药、三叶青活性成分保持与干燥方法选择、人工种植三叶青药材质量控制及医药保健食品研发提供科学依据。方法:(1)以多糖和总黄酮得率为评价指标,采用L9(34)正交设计法优化三叶青多糖和总黄酮提取工艺,分别建立三叶青总黄酮、多糖含量的紫外可见分光光度测定方法和槲皮素含量的HPLC测定方法,并通过建立的这些方法分析测定了浙产人工种植三叶青与野生三叶青、不同产地、不同干燥方法和不同生长期的三叶青多糖、总黄酮及槲皮素含量。(2)三叶青用70%乙醇回流提取得到三叶青乙醇提取物,上D-101大孔树脂,分别用不同浓度的乙醇进行洗脱,得到不同洗脱物TDG-W、TDG-30%、TDG-50%、TDG-70%、TDG-90%,分析评价浙产人工种植三叶青乙醇提取物不同黄酮洗脱组分的抗氧化活性以及抗氧化能力与三叶青黄酮含量的相关性。结果:(1)浙产人工种植三叶青多糖、总黄酮和槲皮素含量分别平均为20.69g/100g、17.58mg/g、57.19ug/g,要高于野生品种的 15.28g/100g、11.57 mg/g、42.46ug/g,两者所含的多糖、总黄酮和槲皮素含量差异显著(P<0.05)。(2)江西所产三叶青多糖、总黄酮和槲皮素含量分别为19.33g/100g、12.98mg/g、43.07ug/g,广西所产三叶青多糖、总黄酮和槲皮素含量分别为15.1g/100g、2.37mg/g、9.41ug/g,福建所产三叶青多糖、总黄酮和槲皮素含量分别为13.93g/100g、12.23mg/g、37.34ug/g,浙江产三叶青多糖、总黄酮和槲皮素含量分别为20.69g/100g、17.58mg/g、57.19ug/g。不同产地三叶青多糖、总黄酮和槲皮素含量差异显著,其中以浙江人工种植品种三种成分含量最高。(3)传统热风干燥方法对总黄酮、多糖和槲皮素造成的含量损失分别达到了 17.18%、20.03%、22.13%,真空干燥对总黄酮、多糖和槲皮素造成的含量损失分别达到了 13.41%、23.79%、9.40%,冷冻干燥的三叶青活性成分含量与三叶青鲜品相当,几乎没有损耗。(4)浙产三叶青三个人工种植品种的多糖和总黄酮含量在不同时期存在明显差异,多糖含超量在2014年12月最高,总黄酮含量在2015年2月含量最高。(5)不同洗脱组分TDG-W、TDG-30%、TDG-50%、TDG-70%、TDG-90%中总黄酮含量分别为 2.69%、33.25%、61.12%、40.54%、4.12%,在这五种洗脱物中,TDG-50%的抗氧化能力最强,其清除DPPH自由基能力、还原能力和总抗氧化能力分别为87.60%(75μg/mL)、1.627(400μg/mL)、1.812(1000μg/mL),要高于或接近于阳性对照品 BHT 的 77.68%(75μg/mL)、1.893(400μg/mL)、0.436(1000μg/mL)。结论:(1)浙产人工三叶青主要活性成分高于野生品种,可以替代三叶青野生品种应用于临床。(2)从三叶青多糖和总黄酮含量等有效成分质量控制角度考虑,浙产三叶青主要活性成分含量最高的时期在生长年限为3年以上,为每年的12月至2月,此期间采收质量最佳。(3)冷冻干燥加工方式能最大限度保持三叶青鲜品的活性成分,为三叶青最佳的干燥方式。(4)三叶青不同洗脱组分均有较强的抗氧化能力,对体外自由基有较好的清除作用,其清除DPPH自由基能力和还原能力均随三叶青总黄酮浓度的增加而上升。总之,该研究为三叶青活性成分保持与干燥方法选择、人工种植三叶青药材质量控制及医药保健食品研发提供了科学依据。