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目的:SUMO- 1基因调节许多和癌症发生、发展有关的蛋白的功能,和癌症的发生、发展关系密切。研究发现,在肝癌细胞株SMMC-7721及临床肝癌标本中SUMO-1基因明显高表达,进一步提示SUMO-1基因和肝癌的发生相关。本实验研究siRNA沉默人肝癌细胞SMMC-7721 SUMO-1基因表达的效果及SUMO-1基因沉默后对SMMC-7721 bcl-2及c-myc基因表达的影响。方法:用脂质体转染法瞬时转染待筛查的三对人工合成的针对人SUMO-1基因的siRNA片段和空白对照这四组细胞,转染终浓度为100nM,在转染后24、48、72小时分别提取RNA及总蛋白,采用RT-PCR及Western Blot检测SUMO-1基因的表达,筛查出有效SUMO-1基因siRNA片段。实验分四组,有效的SUMO-1基因siRNA组,阴性对照组,Lipofectamine? 2000组,并用与前三组具有相同遗传背景和代数的SMMC-7721细胞作为未处理细胞组。用脂质体转染法瞬时转染四组细胞。提取各组细胞总RNA,合成cDNA,用聚合酶链反应(PCR)检测四组细胞中SUMO-1、Bcl-2及c-myc表达情况。使用蛋白抽提液分别提取四组细胞的总蛋白,使用全自动生化分析仪测定蛋白浓度,Western blot法检测细胞中SUMO-1、Bcl-2及c-myc表达量变化。结果:1、实验显示靶序列为:5﹐-CAAGAAACTCAAAGAATCA-3﹐的siRNA沉默效果最好,24小时RT-PCR测得沉默效果为9.80%,48小时沉默效果为73.43%,72小时沉默效果为46.56%,其中48小时沉默效果达到实验的要求。Western Blot检测SUMO-1蛋白的表达变化和RT-PCR的变化规律一致。2、在siRNA致SUMO-1基因沉默后Bcl-2及c-myc基因在SMMC7721中的表达也明显下调,而且变化规律和SUMO-1表达水平一致,差别明显(P﹤0.001)。结论:siRNA是一种理想的沉默SMMC-7721 SUMO-1基因表达的方法, SUMO-1基因沉默后SMMC-7721细胞内的Bcl-2及c-myc表达均明显下调,说明SUMO-1控制癌基因Bcl-2及c-myc的表达。