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目的人双埃可病毒(Human Parechovirus, HPeV)是儿童常见的致病原,但是该病毒感染的流行病学特征和致病特点尚不清楚。本研究通过建立从不同标本进行HPeV快速检测和基因分型的方法,认识上海地区儿童HPeV感染的分子流行病学特征,探讨儿童感染HPeV的致病特点,为HPeV感染所致疾病的防治提供基础数据和理论依据。方法一、收集2008年1月至2010年12月间复旦大学附属儿科医院<5岁住院患儿的粪便标本450份(轮状病毒阴性)。同时期收集78份正常对照粪便标本。通过逆转录-巢式PCR从上述标本中检测HPeV,进而通过基于VP3/VP1区的巢式PCR扩增片段的测序结果进行基因分型。使用MEGA4.1序列分析软件对测序结果进行基因序列分析和系统进化树的绘制；采用SPSS17.0统计分析软件对研究结果和临床资料进行统计分析。二、收集2008年1月至2010年12月间复旦大学附属儿科医院住院期间行肠道病毒检测但结果为阴性的标本,共收集了1112名病人的标本1225份,包括脑脊液(Cerebrospinal Fluid, CSF)标本674份,血液标本550份和腹水标本1份,患儿的年龄范围为1天至14岁。检测方法同一。同时期收集99份血浆标本作为正常对照。结果一、HPeV肠道感染的分子流行病学研究结果如下：450名腹泻患儿的450份轮状病毒阴性的粪便标本中,HPeV阳性221例,总检出率为49.1%(221/450)。其中2008年的检出率为57.3%(86/150),2009年为52.7%(79/150),2010年为37.3%(56/150)。HPeV在男性和女性患儿中的检出率分别为48.1%(139/289)和50.9%(82/161),两者之间的差别无统计学意义(OR=0.9；95%CI,0.6-1.3)。2008-2010年间HPeV肠道感染的年龄分布虽然有差异,但总体趋势一致,即：在新生儿期,HPeV的检出率就很高,三年的平均检出率高达55.7%(64/115),HPeV的高检出率一直持续到2岁,12-23月龄组的平均检出率为47.5%(38/80),2岁以后有明显的下降,2岁至5岁组的三年平均检出率为26.9%(14/52)。HPeV感染年龄的中位数为3月龄。2008-2010年的各个月份均检测到HPeV的感染。2008年和2009年的感染高峰为8月份,检出率分别为91.7%(11/12)和84.2%(16/19),但2009年的12月份呈现小高峰,检出率为84.6%(11/13)。2010年的季节分布特征不明显。在成功测序的179份标本中大部分是HPeV1,占92.2%(165/179),HPeV3、HPeV、HPeV5、HPeV6和HPeV8型分别占0.6%(1/179)、2.2%(4/179)、0.6%(1/179)、1.1%(2/179)和2.2%(4/179)。其中2008年检测到HPeV1和HPeV8型,2009年检测到HPeV1、4、5和6型,2010年检测到HPeV1、3、6和8型。78份正常对照标本中,41份阳性,检出率为52.6%(41/78),33份标本成功进行基因分型,均为HPeV1型。与腹泻组的检出率相比,没有明显的差异(49.1% vs 52.6%；OR=0.87,95%CI：0.52-1.45)。二、HPeV感染致中枢神经系统疾病和脓毒症的分子流行病学研究结果如下：HPeV阳性者92例,检出率为8.3%(92/1112)。其中2008年的检出率为1.3%(2/153),2009年为8.2%(27/328),2010年为10.0%(63/631)。男性患儿与女性患儿HPeV的检出率分别为8.6%(59/683)和7.7%(33/429),两者之间的差别无统计学意义(OR=1.1；95%CI,0.7-1.8)。HPeV感染患儿的年龄范围为5天到13岁,中位数为3岁。2008年只在小于1岁的患儿中检测到HPeV感染,2009年和2010年HPeV的感染分布在各个年龄段,2009年主要见于小于3个月的小婴儿,检出率为18.2%(12/66),2010年6-14岁年龄段的检出率最高,为14.9%(21/141),其次是小于3月的小婴儿(9.9%,8/81)。2008年只在12月份检测到HPeV感染。2009年HPeV感染主要流行于秋冬季节,高峰为12月份(18.8%,9/48),其次为9月份(16.7%,11/66)。2010年的各个月份均能检测到HPeV感染,高峰为1月份(24.2%,8/33),其次为10月份(15.9%,10/63)。在成功分型的49例标本中,48份为HPeV1型,1例为HPeV3型。92位HPeV感染的患儿中,有2位是早产儿,34位收入重症监护病房,其中2名患儿昏迷,1名患儿脑死亡,3名患儿死亡。86位患儿明确诊断为中枢神经系统感染,包括脑炎38例,脑膜炎32例,脑膜脑炎10例,脑脊髓炎6例；33名患儿有脓毒症表现,其中14名患儿有重症脓毒症表现。在99份正常对照血浆标本中未检测到HPeV感染。结论HPeV在儿童肠道中的感染率高。HPeV1是上海地区2008-2010年的主要流行型别和致病型别。HPeV是致上海地区儿童中枢神经系统感染和脓毒症的重要病原体,该病毒感染对儿童的危害应引起临床的重视,对HPeV的筛查应纳入常规的病毒检测行列。