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微量元素锌是动物体内必不可少的微量元素之一,作为酶的重要组成部分和激活剂影响着机体内近300种酶的活性(庞全海等,2002),广泛参与调解和控制机体的代谢活动,参与DNA、RNA、蛋白质、糖类、脂类、维生素和矿物质的代谢。锌在动物体内不仅具有维持骨骼发育、上皮细胞完整性和激素的正常调节的作用并且还具有提高机体免疫力和繁殖力的作用,锌被称为“生命元素”。近些年来随着人们对锌元素研究的深入,更多的锌指蛋白和含锌酶类被发现出来,同时缺锌对动物所导致的疾病机理也更加明确,组织器官中锌的存在形式和功能也更加具体。因此,本文通过在水貂饲粮中添加不同浓度的硫酸锌,研究饲粮不同锌水平对水貂生长性能、消化代谢、氮代谢、血清生化指标、免疫性能、抗氧化性能及脏器系数的影响。探讨锌对水貂生长性能、营养代谢影响的作用机理。同时为完善我国水貂饲养标准提供科学依据,为探究锌在水貂体内的营养作用机制奠定基础。1、饲养试验：分别选取60日龄(育成期)及126日龄(冬毛期)的体重相近的健康雄性水貂各75只,随机分为5组,每组15个重复,每个重复1只,单笼饲养。参考NRC(1982)水貂的相关标准设计饲粮,选用硫酸锌作为锌源。饲粮中添加锌水平分别为0 mg/kg(Ⅰ组)、50 mg/kg(Ⅱ组)、100 mg/kg(Ⅲ组)、300 mg/kg(Ⅳ组)、600 mg/kg(V组),补充ZnSO4 H2O的量分别为0 mg/kg(Ⅰ组),137 mg/kg (Ⅱ),275 mg/kg(Ⅲ组),826 mg/kg(Ⅳ组)和1656 mg/kg (V组),预试期7天,正式期60天,水貂均无不良反应。结果表明,饲粮锌水平对育成期水貂日采食量影响极显著(P<0.01),对育成期水貂日增重影响显著(P<0.05)。饲粮锌水平对冬毛期水貂日增重和日采食量均影响显著(P<0.05)。2、消化代谢试验：日粮和粪便、尿液的干物质、灰分、粗蛋白、粗脂肪、粗碳水化合物、钙和磷成分测定参考AOAC (2003)标准方法。其中粗碳水化合物的计算干物质的含量减去粗蛋白、粗脂肪、灰分。代谢能的计算含量和代谢能的比例组合物是基于取得的消化率和代谢能的以下值：蛋白质18.8兆焦耳/千克,脂肪39.8兆焦耳/千克和碳水化合物17.6MJ/公斤(Hansen,1992).总能的计算是基于营养素的平均燃烧值：蛋白质23.86兆焦／千克,脂肪39.76 MJ/kg和碳水化合物17.58兆焦／千克(Mikael,2012)。锌,铜和锰含量的浓度用原子吸收原子吸收分光光度法(Analytikjena NOV AA 400)来确定。营养物质消化率和氮的保留通过标准方法测定(Dahlman等,2002)。营养物质的表观消化率(AD)的计算如下：AD=AB/A,其中“A”是饲喂的营养物质而“B”是在粪便中的营养物质。结果表明,饲粮锌水平不同不影响育成期水貂营养物质的消化率(P>0.05);饲粮锌水平对冬毛期水貂干物质消化率和脂肪消化率具有显著影响(P<0.05),对其他营养物质无显著影响(P>0.05)。3、血清生化指标测定：分别对育成期水貂和冬毛期水貂采集血液并消毒,每只采血5mL,置于促凝固管中,静置待血清析出后3500r/min、4℃离心10min后获得血清,分析血清中白蛋白、总蛋白、球蛋白、尿素氮、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、钙、磷和锌含量。结果表明,饲粮锌水平的不同能够显著影响育成期水貂和冬毛期水貂血清中的蛋白类指标、氮代谢指标(P<0.05),同时血清中的碱性磷酸酶和锌含量显著提高(P<0.05),磷含量显著下降(P<0.05)。4、免疫相关指标测定：利用免疫测定试剂盒分别测定育成期和冬毛期水貂血清中的免疫球蛋白A、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M。结果发现,饲粮中添加锌能够显著提高育成期水貂血清中免疫球蛋白A的含量(P<0.05)；而对冬毛期水貂的影响极其显著(P<0.05)。5、抗氧化性能的测定：通过测定水貂血清中超氧化物歧化酶、铜锌超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化氢酶含量,分析锌对水貂抗氧化性能的影响。结果表明,饲粮中添加不同锌水平能够极显著影响水貂谷胱甘肽过氧化氢酶及过氧化氢酶的含量(P<0.01),对水貂血清中总超氧化物歧化酶及铜锌超氧化物歧化酶、丙二醛的含量影响显著(P<0.05)。6、屠宰试验：在实验结束后,使用盐酸琥珀胆碱心脏注射处死,迅速取出心脏、肝脏、脾脏和。肾脏,用滤纸吸干血液后准确称取重量然后计算脏器指数(器官重量/体重)。结果表明,饲粮锌水平不同能够显著影响水貂脾脏指数(P<0.05),对心脏、‘肾脏、肝脏指数的影响不显著(P>0.05)。7、基因克隆：利用PCR技术克隆五组水貂中TYRP1和TYRP2基因,并纯化测序,利用半定量RT-PCR技术对五组水貂中TYRP1和TYRP2基因进行表达量分析。结果表明,Ⅲ组水貂中TYRP1和TYRP2基因表达量最高,Ⅰ组和Ⅴ组TYRP1和TYRP2基因表达量较低。