红花、桃仁、怀牛膝水提物抑制转基因斑马鱼模型新生血管生成的效应研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 12次 | 上传用户:hls123
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目的:本实验选用临床上被广泛用于恶性肿瘤治疗的红花、桃仁、怀牛膝等具有活血化瘀功效的中药,基于TG品系flila-EGFP转基因斑马鱼生物模型来筛选其中具有抑制肿瘤新生血管生成效用的中药,客观、系统地评价红花、桃仁、怀牛膝等具有活血化瘀功效的中药在临床上应用于治疗恶性肿瘤的可靠性和安全性,为临床使用活血化瘀中药治疗恶性肿瘤提供客观的实验依据。方法:选用TG品系的flila-EGFP转基因斑马鱼为生物模型,每个样品处理30只斑马鱼胚胎,在12孔板(Falcon)中实验。将工作浓度为200μg/ml的红花、桃仁、怀牛膝水提取物和阳性对照药物-PTK787 (5 μ g/ml)分别处理受精后22小时(22hpf)的斑马鱼胚胎直至48hpf。完整的连接背主动脉(DA)和背长轴血管(DLAV)之间的一段血管,即体节间血管(ISV),是衡量斑马鱼血管新生(angiogenesis)的重要指标。药物处理实验结束后,在体视显微镜(明场)和体视荧光显微镜下进行血管表型观察和拍照,拍照时相为48hpf,以分析各个样品对斑马鱼体节间血管(ISV)生成的影响。同时,观察和统计各个样品诱导的斑马鱼发育毒性和死亡数。结果:各个样品均未出现药物诱导的斑马鱼发育毒性和死亡数事件。体视显微镜(明场)和体视荧光显微镜下完整的ISVs表型观察显示:空白对照组斑马鱼胚胎的ISVs的表达完整、清晰;与空白对照组相比较,阳性对照组采用瓦他拉尼干预的斑马鱼胚胎的ISV及DLAV的荧光表达缺失;红花、桃仁、怀牛膝水提物组斑马鱼胚胎的ISVs的荧光表达都有不同程度的变细、荧光强度减弱,或分布紊乱;其中,怀牛膝、红花水提物组斑马鱼胚胎ISVs的荧光表达变细、强度减弱较为明显,且分布紊乱,怀牛膝水提物组尤为突出。结论:瓦他拉尼能完全抑制斑马鱼胚胎的ISVs及DLAV;临床治疗肿瘤常用活血化瘀中药红花、桃仁、怀牛膝对斑马鱼胚胎的ISVs有不同程度的抑制作用;活血化瘀中药红花、桃仁、怀牛膝对转基因斑马鱼新生血管生成存在抑制效用,从而抑制肿瘤生长及转移;活血化瘀中药怀牛膝、红花、桃仁抑制肿瘤新生血管生成效应有差异,其中,怀牛膝、红花作用明显,且安全、可靠,无致畸、致死事件;推测肿瘤活血化瘀疗法可以抑制肿瘤血管生成,从而抑制肿瘤生长及转移。
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