海洋异养细菌噬菌体的分离及基因组、蛋白组分析

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微型生物则是海洋中数量最大个体却最小的生命群体,海洋微型生物在地球上存在了数十亿年,漫长的时间里,海洋微型生物贡献着庞大的生物量及生产力,联系着生命和非生命系统,在驱动生物地球化学循环中发挥着关键作用。海洋浮游病毒与浮游植物,浮游动物以及浮游细菌一起构成了完整的浮游生物群落,海洋病毒则是其中数量最多生命粒子,生物量仅次于原核生物,对于海洋病毒的研究始于二十世纪六十年代,但直到九十年代其巨大的数量,重要的生态作用及地位才被人们认知,成为海洋生态学前沿研究热点之一,越来越多的研究表明海洋中噬菌体的种类的多样性远远超出我们之前的认知。本论文选取分布广泛、环境适应性强的的典型海洋异养菌群Alteromonas(交替单胞菌),Roseobacter(玫瑰杆菌),Eythrobacter(赤杆菌)的代表菌株为宿主进行噬菌体的分离、生理生化性质研究以及基因组、蛋白组分析。主要结果如下:以Alteromonas(交替单胞菌)属两株具有代表性的不同生态型细菌为宿主进行噬菌体的分离和性质研究。Alteromonas macleodiiATCC 27126为全球表层海域代表性的“表层生态型”菌株;Alteromonas AltDE为南亚得里亚海1000m的深水层中分离得到的“深海生态型”菌株。本文成功分离到一株新的以Alteromonas macleodii ATCC 27126为宿主的长尾噬菌体RAV6062以及两株以AlteromonasAltDE为宿主的无尾噬菌体,并对RAV6062进行了生理参数的测定全基因组分析。研究证明RAV6062具有正二十面体的头部和长的不可伸缩的尾巴,对氯仿不敏感,可侵染其他与宿主进化关系相近的菌株,基因组测序结果显示RAV6062全基因组长度为42722bp,GC含量为54.72%,全基因组比对表明RAV6062属于比较新型的噬菌体,在73个编码蛋白的基因中,注释了 28个功能基因,其中除尾部、头部结构蛋白外,还具有关于噬菌体复制的相关编码基因,其中ORF4,ORF5,ORF6是三个与Vibriophage相近的DNA聚合酶编码基因,同种属噬菌体vB_AspP-H4/4的基因组对比结果中也发现同源性高的尾部结构编码基因。根据噬菌体形态多样性,选取Dinoroseobacter shibae DFL12T以及Erythrobacter.litoralis DSM 8509及Erythrobacter sp.JL475 等 3 株细菌的 8 株噬菌体进行了全蛋白组的研究,每株噬菌体约鉴定得出16~35个功能蛋白,通过丰度的对比发现不同噬菌体的蛋白组成具有一致性,蛋白组结果显示噬菌体主要由尾部组装,噬菌体尾部蛋白,尾管蛋白,尾部纤维蛋白,头尾连接蛋白,主要衣壳蛋白,次要衣壳蛋白,头部形态相关蛋白,头部装饰蛋白及其他结构蛋白构成,参与噬菌体复制及代谢的相关酶类主要有单链DNA结合酶,DNA聚合酶,D-alanyl-D-丙氨酸羧化酶,RNA聚合酶,核糖核酸酶,终止酶等。其中结构蛋白的相对丰度均在60%以上,其中主要衣壳蛋白含量最高,占比约30%~70%,其次是通道蛋白及尾部蛋白,占比2%~10%之间,DNA复制及调节生命活动的酶类占比非常少,绝大多数不足1%。
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