口蹄疫病毒A/GDMM/CHA/2013株VP1 H-2d限制性CTL表位预测与鉴定

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:szf_2009
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口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引发的一种以感染偶蹄动物为主的急性、烈性、热性、高度接触性传染病。其传播途径多、传播速度快、传染性强、病原变异大、严重危害畜牧业的发展和国家的经济贸易。在我国,口蹄疫的防制主要依赖于以强制免疫为主的综合免疫措施,但是目前使用的灭活疫苗有存在着许多缺憾,研究、开发安全、高效的新型疫苗是大势所趋。而表位肽疫苗正是其中一个研究热点。在口蹄疫病毒引发的免疫应答中,细胞免疫起着重要的作用,且结构蛋白VP1上有口蹄疫病毒主要的表位。因此,研究能够诱导细胞免疫应答的CTL表位,将加深对细胞介导的抗口蹄疫病毒免疫的了解,并为设计新型疫苗提供参考。口蹄疫病毒A/GDMM/CHA/2013株是2013年广东省茂名分离的猪源毒,其很可能是由境外传入。因此,研究该毒株的细胞表位、发展相应疫苗,可能可以抵御外来疫情的传入。结构蛋白VP1上有口蹄疫病毒的主要抗原表位位点。研究根据Gen Bank中A/GDMM/CHA/2013株结构蛋白VP1的序列,先借助计算机预测软件预测了A/GDMM/CHA/2013株VP1结构蛋白上H-2d限制性CTL细胞抗原表位,遴选出10条9肽的候选表位进行化学合成。然后用A/GDMM/CHA/2013活毒免疫小鼠,分离病毒特异性脾淋巴细胞,进而将其与候选表位体外共培养,通过T细胞增殖试验、Mouse IFN-γELISPOT试验和流式细胞术对候选表位进行鉴定。研究结果表明,预测的10条候选肽段中仅有2条H-2Dd限制性CTL细胞抗原表位,分别是:p D1(VGPTHVIDL)和p D4(KAPFTRLAL)。本研究为FMDV新的CTL细胞抗原表位的鉴定提供了参考方法,进一步充实了口蹄疫病毒抗原表位数据库资料,也为深入了解细胞介导的抗口蹄疫病毒免疫铺垫了基础。
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