论文部分内容阅读
肿瘤的多药耐药性(multidrug resisitance,MDR)是化疗失败的一个主要原因也是目前肿瘤治疗研究的热点。MDR是多因素共同作用的结果,目前比较肯定的肿瘤MDR产生的机制为多药耐药基因(multidrug resisitance gene 1,MDR1)及其编码产物P-糖蛋白(p-glycoprotein,P-gp)的过度表达。近年来临床研究表明,放射治疗后的肿瘤患者对于化疗的敏感性下降,并且一些相关研究表明在经过X线照射后的肿瘤细胞或者组织中MDR1和P-gp的表达均高于照射前[1-3]。提示放疗有可能导致某些肿瘤产生多药耐药性,目前相关研究报道还比较少。深入研究参与调控MDR1基因表达水平的相关信号传导通路,可以为肿瘤治疗开辟新途径,提供新的靶点。目的:RT-PCR研究累积高剂量X线照射后MDR1 mRNA随时间的表达变化趋势。并且利用基因芯片技术,筛选累计高剂量X线照射前后CNE1细胞株中与肿瘤发生发展有关的差异表达基因,初步探讨MDR1表达变化的机制。方法:选取人鼻咽癌CNE1细胞株进行体外培养及X线照射。照射方法为每次照射200cGy,隔天照射,共照射25次,累积剂量50Gy。分别收集人鼻咽鳞癌细胞株CNE1细胞和X线照射后得到的CNE1/R细胞(分别于照射完成后1、7、21、28、35、42、49天收集),利用RT-PCR技术检测MDR1 mRNA的表达。取其表达上调最明显的一组细胞提取总RNA,反转录成cDNA后与Catalog No.OHS-044芯片进行杂交,筛选表达差异的基因。采用RT-PCR技术,对部分表达差异的基因进行验证分析。结果:RT-PCR检测CNE1细胞株MDR1mRNA半定量灰度值为0.47±0.04,照射50Gy即刻与照射后7,21,28,35,42,49天的CNE1/R细胞MDR1 mRNA半定量灰度值分别为: 0.67±0.06, 0.70±0.02,0.73±0.01,0.63±0.03,0.63±0.09,0.62±0.05,0.62±0.02(P<0.05),表达比照射前明显增高。基因芯片检测照射前CNE1和照射后第21天的CNE1/R细胞差异表达基因,CNE1/R比CNE1表达明显上调的基因有27条,表达明显下调的基因有8条,这些基因分布在细胞凋亡、炎症、应激、雄激素等多条信号传导通路。RT-PCR法检测CNE细胞和CNE1/R细胞中BCL-2 mRNA表达半定量OD值验分别为:0.55±0.02、1.05±0.04;MMP7 mRNA表达半定量OD值验分别为:0.51±0.01、0.82±0.02(P<0.05)。结论:X线照射前CNE1细胞中已经有较弱的MDR1 mRNA表达,累积50GyX线照射可诱导CNE1细胞长时间表达MDR1mRNA,表达强度与照射前相比差异具有显著性。X线照射后引发CNE1细胞内多通路多基因发生变化,它们可能相互调节、协同作用直接或者间接的诱导辐射后MDR的发生。累积大剂量X线照射后,CNE1细胞内BCL-2、MMP7基因表达高于照射前,这同基因芯片方向一致,说明芯片结果可信。