生防菌的筛选及其对苹果树腐烂病的防治研究

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在植物病害生物防治实验室多年研究、获得大量生防菌的基础上,本论文针对苹果树腐烂病开展了生防菌的筛选和田间防病试验研究。通过生防菌的发酵液及滤液抑制腐烂菌菌丝生长试验、孢子萌发试验、离体枝条病斑扩展试验,从现有9株生防菌中筛选出对腐烂病有优良防效的菌株SL01;通过观察SL01的形态特征、测定生理生化特性以及分析16srDNA序列,鉴定该菌株;采用单因素和正交分解试验优化SL01发酵条件;将SL01应用于大田防治。主要研究结果如下:菌丝生长试验发现,9株生防菌的发酵液及发酵滤液对腐烂菌菌丝均有不同程度的抑制作用,其中以菌株SL01的发酵液和发酵滤液的抑菌效果最为显著,分别达到64.2%和42.5%;在液培条件下,菌株SL01、SF6、SF4和F46的发酵滤液在稀释20、50和100倍条件下对腐烂菌菌丝仍有不同程度抑制作用,其中菌株SL01在稀释100倍条件下抑制效果最好,达到55.9%;持续抑菌试验发现,解除生防菌分泌的抑菌物质后,腐烂菌菌丝的生长速度显著下降,受SL01分泌物抑制的菌丝生长速度最慢。显微观察受SL01抑制的腐烂菌菌丝发现,菌丝发黄、变短且畸形。孢子萌发试验发现,9株生防菌的发酵滤液对腐烂菌分生孢子萌发均有不同程度的抑制作用,其中以菌株SL01的发酵滤液抑制效果最为显著,达到69.5%。36h后显微观察发现,在SL01发酵滤液萌发的孢子芽管较短、畸形且粗细不一致。离体枝条病斑扩展试验发现,涂抹9株生防菌发酵液的苹果枝条病斑扩展速度与对照相比有明显差异,涂抹5d后,9株生防菌发酵液对病斑扩展均有不同程度抑制作用,以菌株SL01最为显著,抑制率达到67.0%。涂抹10d后,发酵液抑制效果与5d时相比下降。经培养特征、菌体形态、生理生化特性以及16s rDNA序列分析鉴定,菌株SL01属于极长链霉菌(Streptomyces longissimus)。摇瓶条件下优化了菌株SL01产生抗菌物质的条件,采用单因素和正交分解试验,获得菌株SL01的最佳培养方案为:小米2%,酵母粉1%,MgSO40.15%;在28°℃、初始培养液pH=7.0,接种量2%,装液量50mL/250mL,180rpm培养得到的发酵滤液抑菌活性最强。发酵条件优化后菌株SL01拮抗活性显著提升,涂抹菌悬液后苹果树枝条、果实病斑被明显抑制,防效达到90.0%,涂抹发酵滤液后苹果树枝条平均防效为66.2%,而果实防效为92.5%。大田试验,苹果树树体涂抹SL01菌剂预防试验中,预防效果为48.6%,在病斑治疗试验中,采取刮病斑后涂抹SL01菌剂防治效果100%,划线后涂抹防效为58.3%。
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