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目的:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种渐进性神经系统退行性疾病,以渐进性记忆认知障碍、情感性格及行为改变等为主要的临床表现,其病因及发病机制不详,已成为第四大死亡原因,其发病率及死亡率逐年增高,ADI(Alzheimer’s Disease International,ADI)预测2040年我国痴呆患病率将以336%比例增长,中国的痴呆病人数将等于世界发达国家痴呆数的总和(超过2000万)。由此,AD的预防和治疗已经成为世界各国研究的热点课题。目前有几个不同的学说试图阐明其病因:胆碱能性假说(Cholinergic hypothesis)[8],淀粉样蛋白质假说(Amyloid hypothesis)[9]及微管相关蛋白质假说(Tau hypothesis)[10]等。随着研究的深入,多数学者认为,Aβ沉积诱导的炎症反应是导致AD发病的主要机制。如何减轻炎症损伤成为治疗AD的一条重要途径。HMGB1最初被认为是一种高度保守的核DNA结合蛋白,参与基因表达过程中DNA复制,修复及转录的调节。但是,一旦细胞发生损伤或凋亡,本在胞核中的HMGB1转移到胞浆或/和细胞外。近年来,HMGB1普遍被认为是一种在细胞外参与细胞活化及促炎因子的释放过程中的重要细胞因子。HMGB1自身可能通过RAGE(advanced glycation end products)受体和toll样受体如TLR2及TLR4的活化完成信号转导过程。这些受体的活化导致NF-κB(nuclear factor-κB)的活化,活化的NF-κB诱导造血细胞及内皮细胞中白细胞粘附因子的上调。由此,HMGB1促进了炎症的发生,发展。吴茱萸碱(Evodiamine)来源于芸香科植物吴茱萸的干燥近成熟果实,具有抑制肿瘤止痛降低血压抗炎等作用。对于的治疗,研究发现吴茱萸碱能够改善阿尔茨海默病的认知功能,是一种具有抗炎生物活性的生物碱是核转录因子-κB(NF-κB)的抑制剂,从而抑制COX-2的m RNA的转录,从而抑制炎症反应的发生、发展及恶化。吴茱萸碱能否通过下调HMGB1,TLR4及NF-κB的表达从而产生神经保护作用有待进一步的研究。本实验通过向SD大鼠双侧海马区注射Aβ1-42建立阿尔茨海默病模型,观察大鼠行为学改变以及HMGB1,TLR4及NF-κB蛋白在大鼠海马组织中的表达情况,探讨AD的发病机制及吴茱萸碱的脑保护作用及可能的机制。方法:成年健康清洁级雄性SD大鼠32只,体重250±50g,按照随机数字表法,分为假手术组(Sham组)、假手术+吴茱萸碱组、AD模型组、AD+吴茱萸碱组,每组8只。适应性饲养1周后药物干预组采用灌胃的方式按100mg/kg给予吴茱萸碱,喂养3周,每日一次,而AD模型组和Sham组给予等体积的生理盐水。三周后通运用脑立体定位仪将10μg凝聚态Aβ1-42注入双侧大鼠海马区,从而建立AD动物模型。造模后持续给予药物及生理盐水干预。造模1周后通过历时5天的Morris水迷宫实验,评估大鼠学习记忆力的改变水平,处死动物后运用HE染色法观察实验大鼠海马CA1区锥体细胞的形态学变化,运用免疫组织化学法观察大鼠海马区小胶质细胞的活化水平及HMGB1,TLR4及NF-κB蛋白的表达水平,免疫印记(Western Blot)法测定HMGB1,TLR4及NF-κB蛋白的表达水平。结果:1 Morris水迷宫实验:各组大鼠逃避潜伏期不同(F=38.432,P<0.05),穿越平台次数不同(F=4.388,P<0.05)。AD组大鼠与Sham组相比,逃避潜伏期明显延长、穿越平台次数明显减少(P值均<0.05)。AD+吴茱萸碱组与AD组相比逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数明显增加(P<0.05)。2 HE染色:Sham组海马CA1区锥体细胞排列整齐,分布均匀,形态结构正常,数量多;AD组海马CA1区神经元细胞排列稀疏,结构紊乱,数量明显减少;AD+吴茱萸碱组与AD组相比,实验大鼠海马CA1区神经元数量、形态和结构均有不同程度的恢复—神经元数量增多,排列较整齐,结构较致密,分布较均匀。3吴茱萸碱对HMGB1,TLR4及NF-κB表达水平的影响:在AD组,HMGB1,TLR4及NF-κB的蛋白表达水平及阳性细胞数目较Sham组明显增多(P<0.05);吴茱萸碱干预后,HMGB1,TLR4及NF-κB的蛋白表达水平及阳性细胞数目明显下降,与AD组相比结果有统计学意义(P<0.05)。结论:1通过向大鼠双侧海马区注射凝聚态Aβ1-42,成功建立了大鼠AD模型。2 AD模型组大鼠海马CA1区小胶质细胞大量活化,且HMGB1,TLR4及NF-κB蛋白表达水平上升,说明HMGB1,TLR4及NF-κB蛋白参与AD中炎症反应过程。3吴茱萸碱可以改善AD大鼠的学习记忆能力,修复病理损伤,对AD有一定的神经保护作用。4吴茱萸碱在一定程度上下调了HMGB1,TLR4及NF-κB蛋白的表达,从而抑制了HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路。