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目的检测(?)Rab coupling protein (RCP) mRNA及蛋白在头颈部鳞状细胞癌(头颈鳞癌)组织、癌旁、癌前病变组织及细胞株中的表达,并探索其表达与头颈鳞癌临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学技术检测RCP蛋白在95例头颈鳞癌、16例癌旁组织及18例声带白斑石蜡组织标本中的表达,并统计分析RCP蛋白在头颈鳞癌中的表达水平与其临床病理特征和预后之间的关系；另外,应用RT-PCR技术检测(?)RCP mRNA在10对喉癌新鲜标本及癌旁组织的表达水平；利用Western blot技术检测RCP蛋白在NP-69(鼻咽部永生化细胞株)及头颈鳞癌细胞株(Tu212、Tu686、M2、M4)中的表达水平。结果RCP mRNA在喉癌组织中表达明显升高,而在癌旁组织中表达微弱,差异具有统计学意义；RCP蛋白在癌旁组织、声带白斑(癌前病变)及头颈鳞癌组织中表达呈梯形依次升高,差异具有统计学意义；RCP蛋白在头颈鳞癌中的表达水平与头颈鳞癌的T分期(P=0.028)、临床分期(P=0.012)、淋巴结转移(P=0.004)和肿瘤复发(P=0.016)密切相关,而与患者年龄(P=0.383)、饮酒史(P=0.658)、抽烟史(P=0.811)、肿瘤类型(P=0.153)、分化程度(P=1.004)在统计学上无相关性；Kaplan-Meier生存分析显示头颈鳞癌患者RCP蛋白高表达组与低表达组5年总生存率(Overall survival)分别为40%和75%,5年无病生存率(Disease-free survival)分别为30.7%和64%,差异具有统计学意义(P均<0.05)；多因素Cox比例风险回归模型分析进一步显示,淋巴结转移(P=0.037)、肿瘤复发(P=0.000)和RCP蛋白表达水平(P=0.016)均为头颈鳞癌患者预后的独立影响因素。结论RCP在头颈鳞癌组织及细胞中高表达,而在癌旁组织及NP-69细胞株中表达较低,RCP可能与肿瘤的发生相关；RCP蛋白在头颈鳞癌中的表达水平与与头颈鳞癌患者的复发、转移及预后密切相关,且RCP蛋白表达是头颈鳞癌预后的独立影响因素。这些结果均提示RCP在头颈鳞癌的发生、发展中可能发挥了重要作用,并对头颈鳞癌复发、转移及预后具有评估价值。目的我们前期研究表明RCP蛋白在头颈鳞癌组织中显著上调,并与头颈鳞癌患者的临床分期、复发、转移及预后密切相关。因此,本部分将利用RNAi技术沉默RCP基因在头颈鳞癌细胞株CNE-2中的表达,并观察RCP基因沉默后对头颈鳞癌CNE-2细胞体外生长、迁移及侵袭能力等生物学行为的影响。方法利用慢病毒介导的RCP shRNA沉默头颈鳞癌CNE-2细胞中RCP基因表达,Western blot技术检验RCP基因的沉默效果；嘌呤霉素筛选,建立RCP基因稳定沉默的CNE-2细胞株；通过CCK-8法及平板克隆形成实验检测沉默RCP基因对CNE-2细胞增殖及克隆形成能力的影响；利用Transwell迁移侵袭实验观察RCP基因沉默后对CNE-2细胞迁移及侵袭能力的影响。结果慢病毒介导的RCP shRNA显著抑制了CNE-2细胞中RCP基因的表达。利用嘌呤霉素对转染后的细胞进行筛选,成功建立了CNE-2RCPRNAi+(RCP基因稳定沉默)(?)(?)CNE-2RCPRNAi-(空白对照)细胞株；与正常对照组CNE-2及空白对照组CNE-2RCPRNAi细胞比较,RCP干扰组CNE-2RCPRNAi+细胞增殖能力及克隆形成能力显著减弱。CCK-8实验中通过对OD450测得数据的统计学分析发现,CNE-2RCPRNAi+与CNE-2、CNE-2RCPRNAi-三组细胞生长到第2、3,4,5,6,7天,CNE-2RCPRNAi+与其他两组细胞的增殖能力差异具有统计学意义(P<0.05),而CNE-2、CNE-2RCPRNAi-细胞增殖能力无统计学差异；平板克隆形成实验结果表明,CNE-2RCPRNAi+细胞克隆形成数(均数±标准差)为7.3±3.02,而CNE-2RCPRNAi-、CNE-2细胞克隆形成数(均数±标准差)分别为18.0±3.43、20.1±4.09,独立因素T检验提示和其他两组相比,CNE-2RCPRNAi+克隆形成能力明显减弱,差别具有统计学意义(P<0.01),而CNE-2RCPRNAi-和CNE-2在克隆形成数上无统计学差异(P>0.05); Transwell迁移实验发现24小时后穿过Transwell小室聚碳酸酯膜的CNE-2RCPRNAi+细胞较两对照组(CNE-2和CNE-2RCPRNAi-)明显减少(173.67±8.08vs277.33±8.74,260.67±10.02)(P<0.01); Transwell侵袭实验发现48小时后穿过Transwell小室Matrigel胶的CNE-2RCPRNAi+细胞较两对照组(CNE-2和CNE-2RCPRNAi-)显著减少(94.00±6.56vs184.67±5.51,175.00±9.64)(P<0.01)结论RCP表达抑制后能明显减弱头颈鳞癌CNE-2细胞的体外增殖、迁移及侵袭能力,提示其在头颈鳞癌的恶性进展中发挥了重要作用。