论文部分内容阅读
目的唐氏综合征(Down Syndrome,DS)又称先天性愚型或21三体综合征,是一种最常见的先天性染色体数目畸变,发病率高达0.13%,给家庭和社会带来沉重的负担,故迫切需要一种准确、快速、简便地诊断唐氏综合征的新方法。短串联重复序列(short tandem repeats,STR)是近年来发现的、广泛存在于人类基因组的一类具有长度多态性的DNA序列。它们一般由2~6对碱基构成一个核心序列,核心序列在长度上呈串联重复排列,重复次数通常在15~30次,主要由核心序列拷贝数目的变化产生长度多态性。STR广泛分布于人类基因组中,一般认为,人类基因组平均每6~10Kb就有一个STR基因座,STR有高度多态性并遵循孟德尔共显性遗传,具有操作简便、分型准确和丰富的多态信息量等特点,已成为第二代DNA分析技术的核心。本文应用STR多态位点结合DNA定量分析,对唐氏综合征患儿进行快速基因诊断及发病机理分析,以期建立一种准确、快速的基因诊断唐氏综合征的方法,为产前基因诊断、降低患儿出生率奠定基础。材料与方法选择唐氏综合征关键区域(DSCR)内部及其附近的短串联重复序列D21S11、D21S1270、D21S1437、D21S1435,采集22个核心家系的血样,经SDS-蛋白酶-酚-氯仿抽提法提取基因组DNA,制备6%变性聚丙烯酰胺凝胶,进行高压电泳,凝胶经过固定、染色、显色三步处理至带型清晰,通过STR各基因座扩增条带,判读各个体的基因型,Gene Tools分析软件得出扩增产物的相对比值。结果1、不同个体在某一STR位点的DNA电泳量分析可出现下列4种情况之一:①、只出现一条DNA深带,为一纯合子;②、出现两条DNA带,比例接近1:1,为正常杂合子;③、出现两条DNA带,比例接近2:1,为唐氏综合征患者;④、出现三条DNA带,比例接近1:1:1,为唐氏综合征患者。2、在22个已知的唐氏综合征家系分析中,未发现这4个STR位点有突变基因出现,遗传方式符合孟德尔常染色体共显性遗传规律。3、根据电泳结果,22个核心家系中,18个可确定21号额外染色体来源,其中14名患儿的21号额外染色体来源于母亲,4名来源于父亲。结论1、应用STR多态位点结合DNA定量分析,可对唐氏综合征患儿进行快速、准确的基因诊断,为进行产前基因诊断奠定了基础。2、本文4个遗传标记可确定大多数唐氏综合征患儿额外染色体的双亲起源,为研究染色体不分离的机制奠定基础。该方法操作简便、快速,具有较好的临床应用价值,对于唐氏综合征发生的病因学研究也具有一定的实用价值。