蛋白质组学研究相关技术的发展及其在大鼠海马细胞膜蛋白质组研究中的应用

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:gyl720909
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
  海马(hippocampus)是大脑颞叶内侧的一个脑结构,是哺乳动物学习和记忆的重要结构区。但纵观海马与记忆的研究领域,无论国内国外都没有研究者涉足海马细胞膜的蛋白质组学研究领域。膜蛋白占人类整个基因组编码蛋白质的近三分之一,在细胞生命活动中发挥着重要作用。基于蛋白质整体水平上的海马质膜蛋白质组研究将有助于阐明海马的神经生物学功能并有可能发现一些新的受体与通道蛋白以及药物靶标。   本研究从大鼠海马细胞膜的富集,膜蛋白的分离鉴定等几个方面进行了细胞质膜的蛋白质组学研究,采用了不同的分离鉴定技术路线,包括传统的2DE分离结合LC/Q-TOF方法,以及1D-SDS-PAGE分离结合LC/Q-TOF,1D-SDS-PAGE分离结合MALDI-TOF/TOF方法,分别对大鼠海马组织匀浆提取的质膜蛋白以及急性分离培养的海马细胞提取的质膜蛋白质进行了鉴定;建立了细胞质膜的生物素亲和纯化方法,该方法用包裹了链霉亲和素的磁珠纯化标记了生物素的质膜片段,然后使用磁分离器收集磁珠得到纯的质膜部分,再采用高盐高pH溶液洗涤质膜,实验结果显示该方法提取的膜蛋白具有高含量的质膜特异性蛋白Na+/K+ATPase及Caveolin,且不含有胞质特异性蛋白actin,表明该方法能成功地富集膜蛋白,并能除去质膜蛋白鉴定中最大的污染蛋白——与质膜最紧密相连的胞质骨架蛋白的影响。通过对大鼠海马细胞质膜的蛋白质组学研究,探索了一条适合于生物膜蛋白的蛋白质组学研究方法。在用生物素亲和纯化质膜提取的海马细胞质膜蛋白质组中,明确鉴定了118种蛋白质,其中定位在膜上的蛋白质有74个,占62.7﹪,表明该方法完全适合于膜蛋白质的分析鉴定。根据Swiss-Prot/TrEMBL数据库中对蛋白质功能的描述,对鉴定的蛋白质进行了功能分析,表明这些蛋白质主要为受体(receptor)蛋白质、转运(transport)蛋白质、外部酶(exteriorenzyme)、通信(traffic)蛋白质、结构(structure)蛋白质、粘连(adhesion)蛋白质、伴侣(chaperone)蛋白质及其他(other)蛋白质。其中受体蛋白质与转运蛋白质所占比例最高,均达到19﹪;与此同时还发现了一些未知功能的新蛋白质,有待进一步深入分析。本研究证实了质膜上存在的大量蛋白质与细胞内外分子识别、物质及信息交换密切相关。
其他文献
通过生理生化及生物信息学研究得到如下具有一定创新性的结果:ⅰ.真菌产生低分子多肽为一普适特性,此类多肽在天然纤维素降解中起重要作用。ⅱ.由青霉菌Penicilliumsp.MO3中
随着科学技术的逐步发展,现代科学研究形成了科学实验,理论分析,科学高性能计算的基本模式。伴随着电子计算机的出现,科学计算逐渐成为20世纪重要的科技进步之一。特别是越来越高
本文通过对荣华二采区10
期刊
等离子体作为物质存在的基本形态之一,已经在各行各业得到了广泛的应用。本课题的研究方向主要集中在等离子体构成的天线和隐身方面的研究。当等离子体的频率高于信号的发射频
功率绝缘体上硅的绝缘栅双极型晶体管(SOI-LIGBT)器件兼有双极型三极管(BJT)电流能力强和横向扩散金属氧化物半导体管(LDMOS)开关速度快的双重优势,是多个中高压功率集成电路
本文通过对荣华二采区10
期刊
本文作者利用Ty1/copia-like类反转录转座子转座酶的保守区域设计引物,从菰基因组中扩增得到了反转录酶基因片段序列.对扩增得到的约246bp的片断进行分离和克隆,并随机挑选了
动态双频跳频通信系统具有高保密性、强抗干扰性和稳定性等性能,在现代军事通信领域具有重要的应用前景。本文在现有动态双频跳频同步方案及其跳频系统仿真研究成果的基础上,
  本文对睾丸特异表达蛋白SPAG8的性质和功能进行了研究。文章将SPAG8基因和ACT基因分别构建于pEGFP-C1和pDsRed-N1载体中,同转染CHO细胞,采用Mercurypathwaysystem和PathDet
本文通过野外捕捉(崇明一龄扣蟹和二龄成蟹养殖池塘),野外池塘饲养(崇明新河扣蟹养殖池塘)和室内分析(上海水产大学动物生理学实验室)研究了中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)性