硼对大鼠血清生化指标及睾丸支持细胞的ER-MAPK通路的影响

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通过体内和体外试验研究硼对大鼠血清生化指标及支持细胞ER-MAPK通路的影响。体内试验:选用3月龄清洁级SD雄性大鼠90只,随机分为11组,分别饮用添加0、5、10、20、40、80、160、320、480和640 mg/L硼的蒸馏水,试验期为60d,分别于试验期第30d和60d取材;采集血液和睾丸,采用全自动生化分析仪测定肝功能、肾功能、血糖血脂和免疫等相关血清生化指标,Western Blot检测睾丸组织ER蛋白表达,研究硼对大鼠血清生化指标及睾丸组织ER蛋白表达的影响。体外试验:选用18-22日龄SD雄性大鼠,分离睾丸支持细胞,研究硼对ER阻断前后支持细胞ER蛋白和MAPK磷酸化蛋白表达的影响,以及硼对MAPK阻断前后支持细胞抗氧化功能的影响。1.硼对大鼠血清生化指标的影响与对照组相比,试验30d,各试验组大鼠血清TG、LDL、LP(a)和TC水平不同程度降低;5-320mg/L硼组血清HDL水平升高,其中40mg/L硼组升高显著(P<0.05),480-640 mg/L硼组血清HDL水平降低,但差异不显著(P>0.05)。试验 60 d,5-160 mg/硼组血清 TG、LDL、LP(a)和 TC 水平降低,320-640 mg/L硼组血清TG、LDL、LP(a)和TC水平升高;5-80 mg/L硼组血清HDL水平升高,160-640 mg/L硼组血清HDL水平降低,但差异均不显著(P>0.05)。整个试验期,5-160 mg/L硼组血清AST、ALP、TB、DB和TBA水平降低,其中20 mg/L和40 mg/L硼组AST显著性降低(P<0.05);480-640 mg/L硼组TB、DB和TBA水平升高,10-80mg/L硼组TP和ALB浓度升高,5-80 mg/L硼组血清CRE、BUN和UA水平降低,320-640 mg/L硼组CRE、BUN和UA水平升高,均无统计学意义(P>0.05)。所有硼组的血清IgA、IgM、IgG、C3和C4水平无显著变化(P>0.05)。结果表明,饮水添加硼10-80 mg/L为肝功能的安全有效剂量,肾功能和血脂的硼的安全有效的添加剂量为5-80 mg/L。2.硼对大鼠睾丸组织ER蛋白表达的影响与对照组相比,试验30 d,10-160 mg/L硼组睾丸ERα蛋白表达降低,5 mg/L和320-640 mg/L硼组ERα表达升高,但差异不显著(P>0.05);5-160 mg/L硼组ERβ表达降低,320 mg/L硼组ERβ表达升高明显,640 mg/L硼组的ER表达明显降低;各试验组的GPR30蛋白表达量无明显变化。试验60 d,5-20 mg/L硼组ERα表达降低,40-320 mg/L硼组ERα表达升高;5-20 mg/L硼组ERβ表达降低,40-320 mg/L硼组ERβ表达升高,640 mg/L硼组ERα和ERβ表达明显降低。10-20 mg/L和320 mg/L硼组GPR30表达降低,40-160 mg/L和640 mg/L硼组GPR30表达升高,但差异均不显著(P>0.05)。结果表明,60 d时,40-320 mg/L的硼可促进大鼠睾丸内ERα和ERβ蛋白表达,GPR30蛋白表达对硼的影响不敏感。3.硼对ER阻断前后支持细胞ER蛋白和MAPK通路的影响MPP阻断前,与对照组相比,0.75 mM硼组ERα表达升高,GPR30、p-p38表达降低,差异不显著(P>0.05),32 mM硼组,ERα、ERβ和GPR30表达降低,p-p38和p-JNK表达降低;MPP阻断后,与对照组相比,硼处理组ER蛋白和MAPK磷酸化蛋白表达均升高,但差异不显著(P>0.05)。PHTPP阻断前,与对照组相比,硼处理组ER蛋白和p-p38、p-JNK蛋白表达均降低,p-ERK表达升高;PHTPP阻断后,与对照组相比,硼处理组ERα和ERβ蛋白表达降低,p-p38和p-JNK表达升高。G-15阻断前,与对照组相比,0.75 mM硼组ERα和p-ERK表达降低,p-p38和p-JNK表达升高,32 mM硼组ERα、ERβ、p-JNK和p-ERK表达降低,GPR30和p-p38表达升高;G-15阻断后,与对照组相比,0.75 mM硼组ERα和p-ERK表达升高,ERβ、GPR30和p-JNK表达降低,32 mM硼组ER蛋白和MAPK磷酸化蛋白表达均明显降低,但无显著差异(P>0.05)。4.硼对MAPK阻断前后支持细胞抗氧化功能的影响p38阻断前,0.75 mM硼组支持细胞SOD和GSH-Px活性提高,MDA含量降低;p38阻断后,0.75 mM硼组MDA含量和GSH-Px活性明显升高,SOD活性降低,32 mM硼组SOD活性明显升高,但差异不显著(P>0.05)。JNK阻断前,0.75 mM硼组SOD活性明显升高,MDA含量降低,GSH-PX活性无明显变化;JNK阻断后,0.75 mM硼组SOD活性降低,MDA含量和GSH-PX活性升高,32 mM硼组SOD活性及MDA含量升高,GSH-Px无明显变化(P>0.05)。结果表明:p38和JNK阻断前后,SOD活性无明显变化,GSH-Px活性和MDA含量降低。
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