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第一章大麻二酚促进自噬流减轻蛋氨酸/胆碱缺乏饲料诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝炎目的:观察大麻二酚(CBD)对蛋氨酸/胆碱缺乏饲料(MCD)诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治疗作用并探讨其中的分子机制。方法:成年雄性SD大鼠给予MCD喂养同时给予CBD(2mg/kg/day,腹腔注射)治疗10周。观察经MCD喂养及CBD治疗后与对照组之间大鼠肝脏重量变化,肝脏病理病变,血清中转氨酶变化,肝脏中胆固醇和甘油三酯含量变化,肝脏纤维化程度以及自噬流的改变。结果:MCD饲料喂养的大鼠经过CBD治疗后,肝脏的病理病变得到减轻,血清中ALT和AST水平下降,肝脏的重量降低,肝脏中胆固醇和甘油三酯含量减少;肝脏的纤维化程度降低,Col1A1的mRNA水平减少。MCD饲料诱导的NASH病变组肝脏中LC3-II/LC3-I比值降低,p62的蛋白水平增加;经过CBD治疗后,LC3-II/LC3-I比值增加,p62的蛋白水平降低。结论:CBD减轻了MCD诱导的大鼠NASH,CBD对肝脏自噬流的促进作用部分解释了CBD的肝脏保护作用。第二章大麻二酚促进自噬减轻棕榈酸诱导的肝细胞损伤目的:观察大麻二酚(Cannabidiol,CBD)对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导肝细胞损伤的治疗作用,并考察其中自噬相关的潜在机制。方法:原代培养大鼠肝脏细胞,给予PA(800μM)刺激24小时,同时给予CBD(5μM)和自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ,50nM)处理。实验1分组为:(1)对照组;(2)PA刺激组;(3)PA+CBD处理组;(4)PA+CBD+CQ处理组。处理时间为24 h。Western blot法观察自噬;流式法考察凋亡;聚合酶链式反应法考察内质网应激相关基因的表达;探针法考察线粒体功能相关指标。实验2分组:(1)对照组;(2)CBD低剂量组;(3)CBD高剂量组。处理时间为24 h。Western blot法观察自噬。结果:与对照组相比,PA刺激组肝细胞内LC3-II/LC3-I的比值和p62的蛋白表达增加,细胞凋亡增加,内质网应激标志因子C/EBP同源蛋白、糖调节蛋白78kd、X盒结合蛋白1的mRNA表达增加,线粒体膜电位降低,线粒体活性氧的生成增加。与PA刺激组相比,PA+CBD组肝细胞内的自噬流恢复,细胞凋亡减少,内质网应激和线粒体失常减轻。同时再给予CQ处理可以逆转CBD的保护作用。在没有PA刺激的条件下,CBD对自噬流没有明显影响。结论:大麻二酚通过促进自噬流减轻棕榈酸诱导的肝细胞凋亡,内质网应激以及线粒体功能下降。第三章自噬在蛋氨酸/胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎中的作用目的:阐明自噬在小鼠MCD饮食诱导的脂肪变性、纤维化、炎症、线粒体功能障碍和内质网应激等方面的作用。方法:以MCD饲料喂养小鼠10周,同时以雷帕霉素(一种自噬增强剂)和氯喹(一种自噬抑制剂)处理10周。通过生化和组织结构,并联合肝脏基因表达分析,来对肝脏损害进行评估。结果:MCD饲料喂养的小鼠肝脏中LC3-II/LC3-I比值降低,p62的蛋白水平增加,肝脏的病理病变加重,血清中ALT升高,肝脏/体重升高,肝脏中甘油三酯含量增加,肝脏的纤维化程度增加,Col1A1的m RNA水平升高,线粒体功能障碍,内质网应激更加明显。雷帕霉素治疗后上述结果被改善,氯喹处理后病变加重。讨论:自噬流在MCD饲料喂养的小鼠肝脏中被削弱,这可由LC3-II/LC3-I比率下降和p62蛋白质表达增加得到印证。由雷帕霉素增强的自噬活动减弱了MCD诱发的脂肪变性、纤维化、炎症改变、线粒体功能障碍和内质网应激;相反,氯喹加重了MCD小鼠的肝脏损害。