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羊快疫（Braxy）是由腐败梭菌引起的急性、致死性传染病。腐败梭菌（Clostridium septicum）是一种革兰氏阳性菌,该菌感染人和家畜引起恶性水肿,因此曾被称为恶性水肿病。羊快疫以发病急、死亡快且感染初期症状不明显为主要特征,对人类健康和畜牧业生产造成严重危害。因此,迫切需要建立一种针对羊快疫等腐败梭菌病的快速诊断方法,以便应用于基层生产,从而做到及时有效防治。同时,疫苗免疫是针对腐败梭菌病有效的预防措施,研发更加有效的疫苗对于此病的防控至关重要。因此本研究根据腐败梭菌生长繁殖特性,发明了一种新型的腐败梭菌培养方法。在此基础上,制备了腐败梭菌多克隆抗体,建立胶体金试纸条检测方法;并制备了腐败梭菌类毒素疫苗,为羊快疫的诊断和防控提供技术支持。研究内容可分为以下三个部分:1、腐败梭菌新型培养方法的建立根据腐败梭菌生长培养需要,设计腐败梭菌培养基,接种腐败梭菌参考株（ATCC12464）,并置于不同气体环境下进行培养,对不同时间下腐败梭菌增菌情况进行OD600nm测定。最终确定培养基成分和配比,并发现在一定混合气体配比条件下,且pH为7.8时,腐败梭菌菌体培养OD600nm值达到最高。本研究显示,腐败梭菌在自制培养基中菌液OD600nm可达到1.981,而在通常使用的厌气肉肝汤培养基中仅为1.055,增菌效果明显提高,此外,本研究探索出腐败梭菌在pH为7.8的条件下有较好的产毒能力。2、腐败梭菌胶体金试纸条检测方法的建立将腐败梭菌参考株（ATCC 12464）进行菌种复苏和增菌培养后,使用0.4%的甲醛将浓缩后的菌体进行灭活,并获得抗原,使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamide gel electropHoresis,SDS-PAGE）对菌体蛋白进行分析。将抗原与弗氏佐剂混合,对日本大白兔进行4次免疫,获得多克隆抗体,抗体效价可达到1:1024000,并且特异性良好。纯化后的抗体最适标记量为10μg/mL,经测定最适标记pH为8.0,胶体金-抗体结合物原液的最佳工作浓度稀释比为1:4。对腐败梭菌胶体金试纸条进行检测,显示菌液稀释6倍后,仍检测出阳性;腐败梭菌感染豚鼠血清呈阳性,而诺维氏梭菌感染豚鼠血清呈阴性,显示灵敏性和特异性良好,且临床样本检测符合预期。3、腐败梭菌类毒素疫苗的制备和应用将腐败梭菌参考株（ATCC 12464）进行菌种复苏、增菌并产毒,将外毒素粗提、灭活制成类毒素后与白油佐剂充分混合,制备腐败梭菌类毒素疫苗。此疫苗免疫小鼠21天后血清中腐败梭菌毒素抗体效价达到1:6400,且均能抵抗1个小鼠MLD攻击。以不同剂量免疫绵羊,结果表明接种3.5mL组免疫效果最佳,且在免疫后的第21天血清中腐败梭菌毒素抗体效价达到最高,并维持到第6周,说明首次免疫抗体持续时间较长。接种3.5mL腐败梭菌类毒素疫苗绵羊免疫21天后,血清小鼠中和效价达到1:600。本研究创新性地发明了新型腐败梭菌培养方法,并以此为基础,建立了腐败梭菌胶体金检测方法和腐败梭菌类毒素疫苗。经检测,腐败梭菌胶体金检测方法具有较好的特异性和灵敏性,可为羊快疫的临床诊断提供检测依据。腐败梭菌类毒素疫苗有效抗原成分高,免疫效果理想,抗体效价较高且维持时间较长。本研究为腐败梭菌培养提供了新的技术方法,为羊快疫的诊断和防控提供了理论依据和技术支持。