哺乳动物受精是由一系列复杂有序的步骤组成的细胞相互作用过程,最终导致精卵质膜融合形成受精卵。已在精子和卵子上各鉴定出了若干与精卵融合有关的分子,这些蛋白在顶体反应后如何相互作用从而引发精卵膜融合的分子机制尚不清楚。在这些精卵融合候选分子中,通过基因敲除小鼠证明精子上的免疫球蛋白超家族(IgSF)成员Izumo1是精卵融合必需的分子。最近又发现Izumo1的N端是一个能够相互结合的结构域,称为Izumo结构域,含有Izumo结构域的成员构成一个Izumo家族,至少还有另外三个家族成员Izumo2、Izumo3和Izumo4,而且都在睾丸中表达,但目前对Izumo家族这三个新成员的功能尚未展开广泛的研究。本实验室已经报道了绵羊和绒山羊Izumo1基因和cDNA序列并做了较细致深入的研究。本研究克隆了绵羊和绒山羊的Izumo3cDNA,克隆的绵羊和绒山羊Izumo3cDNA长946bp,二者同源性为98.3%,并与牛Izumo3cDNA同源性达到97.3%。生物信息学分析显示,羊Izumo3是个240aa的膜蛋白,N端1-22氨基酸构成了信号肽、179-201氨基酸组成了跨膜区。本实验在大肠杆菌中表达了绒山羊Izumo3重组蛋白,在经纯化后作为免疫原免疫小鼠,制备了小鼠抗绒山羊Izumo3的腹水多克隆抗体,并用戊二醛交联法纯化了自制的腹水多克隆抗体。用纯化的抗体进行免疫组织化学研究了Izumo3蛋白在羊睾丸组织中和精子上的细胞定位。结果显示绒山羊的Izumo3蛋白在睾丸精子发生过程中减数分裂各期细胞中均表达,在成熟精子中位于头部的赤道以下部位和精子尾部,并且在顶体反应前后位置不变。