论文部分内容阅读
目的：本实验拟通过对乳腺癌患者的离体癌组织进行体外细胞培养，继而裂解提取蛋白，探索人乳腺癌细胞体外培养及热休克蛋白70（HSP70）与表皮生长因子受体（HER）蛋白复合物分离纯化的方法，检测HER1-4在不同患者乳腺癌细胞中的含量，初步建立人乳腺癌HSP70-HER谱。 方法：取65例符合条件的人乳腺癌离体组织，通过消化、清洗、接种、换液、传代、冻存等过程进行细胞培养。将热休克处理后的细胞通过裂解、破碎、离心后，利用ConA Sepharose亲和层析及ADP agarose亲和层析的方法获取纯化蛋白，并通过SDS-PAGE电泳验证为HSP70-HER蛋白复合物。再对裂解液中的各成分含量进行ELISA测定，通过K-means聚类算法，依据表皮生长因子受体家族（HER family）各成员含量梯度进行分类，建立人乳腺癌HSP70-HER谱。采用Spearman秩相关检验，探索HER家族各成员之间，以及HER家族与患者临床特征的相关性。 结果：本次实验成功地将人乳腺癌细胞体外培养，培养成功率76.9%，并通过分离纯化获得了较纯的HSP70-HER蛋白复合物。将每种表皮生长因子受体按浓度梯度分为高、中、低三组，初步建立人乳腺癌HSP70-HER谱。同时，发现人乳腺癌细胞HER1含量与患者年龄呈中等程度正相关（rs=0.325，P=0.021），HER2含量与淋巴结是否转移存在较高程度正相关（rs=0.659，P=0.000）。HER3及HER4与各类临床特征指标未提示相关性。在HER家族成员之间，HER1含量与HER2含量存在较低程度的正相关（rs=0.285，P=0.045）；HER1与HER4含量存在较低程度的负相关（rs=-0.279，P=0.050）。其他HER家族成员间未发现相关。 结论：此次实验成功的将人乳腺癌离体组织进行体外原代培养，并提取出较高纯度的HSP70-HER蛋白复合物溶液，初步建立乳腺癌 HSP70-HER谱，并发现HER家族各成员含量之间，和其与患者临床特征之间存在一定的相关性。