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目的对猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV表面蛋白GP2、GP3、GP4与GP5进行高效原核表达，纯化后进行动物免疫试验，比较GP2、GP3、GP4、GP5及其组合的免疫学效应，探讨其作为疫苗候选主要抗原的可能性方法根据Genbank中猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV JXA1株的已知序列，利用RT-PCR方法扩增PRRSV ORF2、ORF3、ORF4和ORF5基因，分别插入原核表达载体PET-32a，转化E.coli进行高效诱导表达，经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western blotting实验，鉴定正确的GP2、GP3、GP4、GP5纯化蛋白按不同的组合方式，添加佐剂后对小鼠进行单独免疫和联合免疫，检测免疫原性；使用生物学信息学技术，根据已知目的蛋白的序列对目的蛋白的结构、同源性、抗原性作预测和分析。结果1）RT-PCR、酶切和测序结果显示目的基因克隆成功且无突变，SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果中，均可观察到特异性目的条带，表明本实验正确表达了PRRSV表面蛋白GP2、GP3、GP4与GP5，并且亲和层析实验后的GP2~5蛋白纯度可达到90%。2）使用纯化后的GP2~5四种蛋白对Balb/c小鼠进行腹腔免疫试验，实验过程中小鼠没有死亡，表面重组蛋白的安全性；收集小鼠血清对免疫结果进行检测分析并比对后显示，四种蛋白均具有免疫源性，可刺激机体产生良好的免疫应答，其中，GP2的抗体效价最低，GP5抗体效价最高，GP2、GP3、GP4同时免疫的抗体效价与GP5相接近，而GP2、GP3、GP4、GP5同时免疫后具有相对更高水平的抗体效价。3）三免1周后四种蛋白诱导的IgG水平明显升高，且均诱导产生了sIgA；实验组IgG1和IgG2a的检测结果均高于PBS组，且水平相对接近；同时检测到分泌的细胞因子IFN-γ和IL-4水平，结果表明四种表面蛋白GP2~5刺激机体同时诱导了体液和细胞免疫应答。结论表达出PRRSV JXA1株表面蛋白GP2、GP3、GP4与GP5，作为亚单位疫苗的候选抗原进行免疫检测。通过单独免疫试验显示，PRRSV四种表面蛋白均有免疫原性，但免疫原性差距较大。通过联合免疫试验显示，GP2、GP3、GP4三种蛋白联合免疫与GP5蛋白单独免疫后的检测结果没有明显差异，说明GP2、GP3、GP4三种结构蛋白是以三聚体形式共同参与了免疫应答反应。综合结果表明，GP5可单独作为保护性抗原制备疫苗，GP2、GP3、GP4不适合单独作为保护性抗原制备疫苗；而GP5与GP2、GP3、GP4联合免疫拥有相对更好的免疫效果。