研究背景：CD44是一种多功能的细胞黏附分子和细胞表面受体。它参与胞外基质结合，细胞迁移和淋巴归巢等过程。CD44有多种亚型，包括CD44s(标准型)，CD44E(上皮细胞型)和CD44v(变异体)。研究发现标准型CD44与维持组织的三维结构有关。而CD44变异体，特别是CD44v6在胃癌等多种癌症的远处转移和肿瘤细胞的浸润生长起重要作用。　　 近来RNA干扰(RNA interference,RNAi)作为一种有效的基因沉默技术用于基因治疗等方面。自从它的机制发现后，小干扰RNA(siRNA)已经应用于基因功能的分析和疾病治疗中。大量研究表明，RNA干扰对于多种疾病(包括癌症)的治疗具有广阔的前景。　　 siRNA的有效运输需要载体系统克服细胞内外的多个屏障。近来，脂质体和阳离子聚合物为基础的非病毒载体是siRNA体外应用中比较常用的运载工具。它们与病毒载体相比，具有低免疫原性和高安全性等优点。而阳离子聚合物为基础的非病毒载体与脂质体比较，有以下优点：安全性更高，方便大规模生产，高稳定性，结构易调整。在作为非病毒载体的阳离子聚合物中，聚乙烯亚胺(PEI)结构中有多个胺基基团，它能够复合带负电的DNA或siRNA，产生“质子海绵”的效应。一些研究表明，PEI的转染率高于其他的阳离子聚合物。然而，PEI的体内毒性较大。因此，聚乙二醇(PEG)用来修饰PEI，提高基因转染率并降低了细胞毒性。　　 目的：本研究的目的是探索非病毒基因载体聚乙烯亚胺-聚乙二醇(PEI-PEG)和siRNA形成纳米微粒的制备、理化性质及其在体外转染胃癌细胞后对CD44v6基因的干扰效果。　　 方法：本研究采用人工合成的PEI-PEG纳米材料，以不同的N/P比(即PEI-PEG的胺基基团和siRNA的磷酸根基团的理论电荷比)，使其与靶向CD44v6基因的siRNA形成复合物。通过粒径和电位的测定、凝胶阻滞试验、扫描电镜等试验方法，观察PEI-PEG/siRNA纳米微粒的理化性质及复合效果。　　 以lipo2000/siRNA和PEI(25kDa)/siRNA做对照，MTT细胞毒性试验检测纳米微粒对胃癌SGC7901细胞的毒性。　　 绿色荧光FAM标记的siRNA转染胃癌SGC7901细胞后，分别用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染率的高低。　　 用PEI-PEG/siRNA-CD44v6纳米微粒转染胃癌细胞后，用RT-PCR和Western Blot试验分别在mRNA水平和蛋白水平分析siRNA对CD44v6的基因下调作用。　　 结果:　　 1)试验结果显示，随着N/P比的增大，PEI-PEG/siRNA复合物的粒径有减小的趋势。当N/P=30时，纳米微粒的粒径为(192.1±2.8)nm。　　 2)同时N/P比由5增加到10，表面电位逐渐增大，由(-5.76±1.12)mv增加为(26.86±0.76)mv。　　 3)扫描电镜下纳米微粒的形态呈大小均一的球形，大小在240nm左右。　　 4)当N/P比为15时siRNA和PEI-PEG完全复合，凝胶阻滞试验无条带出现。　　 5)流式细胞仪测得的细胞基因转染率随着复合物N/P比增大而增大。当达到N/P=30时，转染率为75.6±9.2％，高于对照组lipo2000/siRNA和PEI(25kDa)/siRNA。　　 6)荧光显微镜下显示，随着PEI-PEG/siRNA复合物N/P比增大，转染进胃癌细胞的FAM标记的siRNA增多。且N/P=15和30组，细胞内的FAM-siRNA高于lipo2000和PEI(25kDa)组。　　 7)MTT试验表明，PEI-PEG的细胞毒性随其终浓度增加而增大，PEI-PEG的毒性低于相同终浓度时PEI的毒性。而且，当N/P比小于15时，PEI-PEG/siRNA的毒性明显低于lipo2000/siRNA。　　 8)RT-PCR和Western Blot分析表明在mRNA和蛋白水平siRNA对胃癌细胞的CD44v6基因表达有下调作用。CD44v6蛋白表达下调到正常59.7±3％的水平。　　 结论:　　 1)本研究表明PEI-PEG作为一种新颖的非病毒基因载体，可与siRNA有效结合形成纳米微粒。　　 2)PEI-PEG与siRNA复合成粒径在200nm左右、带正电荷的纳米微粒，能将siRNA有效的转染进胃癌细胞中。　　 3)PEI-PEG具有细胞毒性相对小、转染率高等优点。　　 4)PEI-PEG/siRNA复合物对胃癌细胞的CD44v6基因表达有明显的下调作用。