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银屑病是临床常见的慢性易复发的红斑、鳞屑性疾病。本病临床可分为寻常型、关节病型、红皮病型、脓疱型4个类型。病程慢性,反复发作。其发病机理尚未完全明确。目前研究认为银屑病的发病机制主要是由辅助性Th细胞及其相关细胞因子介导的以角质形成细胞为靶点的炎症反应。Th22细胞是新发现的CD4+辅助性T细胞亚群,在银屑病外周血中高表达,其主要细胞因子为IL-22。通过其实现相关生物学功能。在银屑病病人外周血及皮损中IL-22水平和银屑病的严重程度呈明显的正相关。我们的前期研究表明肝素结合表皮生长因子样生长因子(heparin-binding epidermal-growth-factor-like growth factor,HB-EGF)在银屑病表皮KC异常增殖和其转归中发挥重要作用。本课题的前期研究表明IL-22可以诱导体外培养Ha Ca T细胞表达HB-EGF,但作用机制未明,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK-ERK1/2)通路和转录激活因子途径(JAK/STAT)这两种信号通路在银屑病发病机制中起不可或缺作用。他扎罗汀诱导基因3(Tazarotene-induced gene 3,TIG3)是一种肿瘤抑制因子。TIG3可以调节角质形成细胞的增殖和分化,在银屑病表达降低。综上所述,我们推测IL-22促KC分泌HB-EGF可能与MAPK-ERK1/2和JAK/STAT这两条信号通路有关,且与TIG3表达异常存在一定关系。IL-22通过促进HB-EGF表达,抑制TIG3表达参与银屑病发生、发展。本实验研究IL-22促HaCaT细胞分泌HB-EGF作用机制及对HaCaT细胞分泌TIG3的影响。目的:研究白介素22(Interleukin-22,IL-22)对角质形成细胞表达HB-EGF的作用机制和对TIG3表达影响及作用机制。方法:1、以不同浓度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和PBS作用于Ha Ca T细胞24小时后,提取细胞总蛋白,用Western blot法检测IL-22对细胞MAPK-ERK1/2和JAK/STAT这两条信号通路的影响;应用相关信号通路阻断剂PD98059和AG490与IL-22作用于Ha Ca T细胞后分别提取干预后细胞总蛋白及总m RNA,用Western blot法、ELISA法和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测其对Ha Ca T细胞分泌HB-EGF的影响。应用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理,P<0.05认为有显著性差异。2、应用咪喹莫特诱导小鼠背部皮肤产生银屑病样皮损,然后皮损处皮下注射1μg IL-22,48h后处死小鼠,取下背部皮肤,HE染色观察小鼠皮肤的改变,免疫组化观察HB-EGF的表达。3、用不同浓度(12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L)IL-22和应用相关信号通路阻断剂PD98059和AG490与IL-22处理Ha Ca T细胞,对照组用等量PBS处理,应用免疫荧光法检测细胞内TIG3蛋白的表达位置,分别提取干预后的细胞总蛋白及总m RNA,用Western blot法、ELISA法和实时荧光定量RT-PCR法检测其对Ha Ca T细胞分泌TIG3的影响。应用SPSS 17.0统计软件包进行统计学处理,P<0.05认为有显著性差异。结果:1、IL-22可诱导HaCaT细胞MAPK信号通路中P-ERK1/2蛋白的增加和JAK2/STAT3信号通路中P-JAK2和P-STAT3蛋白的升高。加入信号通路特异性抑制剂PD98059及AG490后HB-EGF蛋白和m RNA的表达较IL-22干预组明显降低。2、咪喹莫特持续作用于Bal B/c小鼠背部,可以成功诱导小鼠银屑病样皮损,IL-22皮下注射可引起正常Bal B/c小鼠背部及银屑病小鼠皮肤表皮中HB-EGF表达的升高。3、IL-22可引起Ha Ca T细胞中TIG3蛋白水平的降低,其作用的强度与浓度有关:不同浓度IL-22处理组的细胞分泌TIG3的量均较对照组降低,且随着IL-22浓度的升高,其对TIG3表达的抑制作用逐渐增强。应用信号通路特异性抑制剂PD98059及AG490后IL-22对TIG3抑制作用较IL-22组减少。差异有统计学意义。结论:IL-22可以引起Ha Ca T细胞中MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3这两条信号通路激活。IL-22诱导Ha Ca T细胞产生HB-EGF蛋白的作用机制可能与MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3这两条信号通路有关。IL-22可引起Bal B/c小鼠背部正常皮肤及银屑病样皮损表皮中HB-EGF表达的升高。IL-22可以抑制Ha Ca T细胞中TIG3表达,抑制作用的强度与IL-22浓度有关,作用机制可能与MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3信号通路有关。