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穿梭载体研究克隆基因在细胞中的表达，以及探索基因功能及表达调控机理方面具有重要意义。目前，国内外在大肠杆菌、枯草杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳类动物细胞上都建立了不同的表达系统，其中人们对大肠杆菌进行了长期研究，对其特性和遗传背景了解的非常清楚，而枯草芽孢杆菌具有非治病性，因此构建既在大肠杆菌，又在枯草杆菌中表达的穿梭载体用于克隆基因的表达有很大价值。本文以P59为启动子，构建了可在大肠杆菌和枯草杆菌中表达的表达载体GJ01，其带有氯霉素抗性筛选标记基因，并以β-半乳糖苷酶基因（bga）作为报告基因检测所构建载体的表达特性。为了得到高效的表达载体，对所构建的载体进行了优化，为下一步建立枯草杆菌高效表达载体系统奠定了基础。通过PCR克隆了大肠杆菌的复制子rep, 然后将rep连接到质粒pBluSKM上得到E3，然后酶切rep和部分多克隆位点与PCR扩增的pGDV1的骨架连接，构建了大肠杆菌和芽孢杆菌之间的穿梭克隆载体pGDVM。此载体带有大肠杆菌和芽孢杆菌的复制子、氯霉素抗性基因和多克隆位点，便于在大肠杆菌和芽孢杆菌中进行克隆操作。以P59为启动子，以构建的pGDVM为骨架，从pAX01上PCR扩增核糖体结合位点RBS1和终止子序列克隆到pGDVM上，即构建成大肠杆菌和芽孢杆菌之间的穿梭载体GJ01。以β-半乳糖苷酶基因（bga）作为报告基因检测表达载体GJ01的表达活性，在大肠杆菌和枯草杆菌中β-半乳糖苷酶（Bga）活性最高分别达到75.3和83.2个密勒单位，表明所构建的载体具有较强的表达活性。以核糖体结合位点RBS2、RBS3、RBS4和RBS5代替GJ01-bga中的RBS1，对构建的载体进行了优化。得到GJ02-bga中Bga在大肠杆菌的酶活性达到253.8个密勒单位(miller)，GJ05-bga中Bga在芽孢杆菌中的酶活性达到135.4个密勒单位，为构建大肠杆菌和芽孢杆菌之间的穿梭表达系统奠定了基础。以枯草杆菌1094为材料，克隆了枯草芽孢杆菌生物素操纵元基因的bioW和bioB基因，构建了两基因的表达载体GJ01-bioW和GJ01-bioB，对两基因进行了表达，通过微生物法和高压液相色谱法测定了生物素的表达量。结果表明在摇瓶培养36h和48h时，构建菌株的生物素产量明显低于宿主菌的生物素产量。用测量OD值法也得到同样的结果。由此表明bioW和bioB基因的高表达对宿主菌具有生长抑制作用，为工业发酵提供参考。